飞翔 发表于 2021-6-28 21:14
用过ebio和BD的固定破膜剂进行检测,没有问题
我是按照说明书里步骤来的,
1、加入1mL1*固定液重悬混匀细胞,震荡混匀3s,室温避光孵育60min;
2. 继续加入2ml 1*破膜buffer,350g离心5min,弃上清。共2次。
3. 100ul 1*破膜buffer重悬细胞,加入2 ul PE-FoxP3抗体,室温避光孵育30min;
4. 加入2ml 1*破膜buffer,350g离心5min,弃上清;
5. 加入500 uL PBS洗涤,350 g 离心5 min, 弃上清;。
6. 300 uL PBS重悬细胞,上机检测。(保存、运输过程要避光)。
还有离心的转速不能太大是吗,但是我发现有时候350g的速度不太能把细胞沉淀下来,就提高到了400g,是可行的吗?
还有做过成功的老师能不能给我看一下您的步骤,还有做出来的染的Treg的图呢,我固定破膜完以后和其他管的细胞分群都不一样了 |