小鼠外周血体积法和微球法做绝对计数

汀雅 · 发表于 2021-7-27 09:58:39

想请教各位老师，我第一次做绝对计数，不知道哪种方法好想做下比较，但是遇到了以下问题，请大家帮忙分析下可能的原因。
如图所示，我用小鼠外周血做绝对计数，体积法和微球法用的是同一个血样，抗体、裂解液也是一样的，抗体信息如下：CD45 BV711、CD3 PE-Cy7、CD19 PE。
问题：体积法中CD3和CD19均出现了三群峰，补偿已调节，同一个样在微球法中就只有两群分峰，这是为什么呢？这种情况该如何画门看绝对计数呢？

niwanmao · 发表于 2021-7-27 11:18:20

体积法，是不是未经洗涤？

bslhk · 发表于 2021-7-27 11:22:55

这两种方法计数结果可能有差异，但是不应该出现你说的一个有2个峰一个有三个峰。你可以先用体积法测，完后同一个样本加入微球再测。看一下出来的图形.

tiger · 发表于 2021-7-27 12:18:54

本帖最后由 tiger 于 2021-7-27 12:22 编辑

niwanmao 发表于 2021-7-27 11:18
体积法，是不是未经洗涤？

这两种方法都不能洗，结果很怪异。并且体积法CD3+CD19超出了100%

汀雅 · 发表于 2021-7-28 08:59:52

niwanmao 发表于 2021-7-27 11:18
体积法，是不是未经洗涤？

两种方法都没有洗涤，不过体积法在裂解15分钟后我有加1mlPBS终止裂解然后上机，微球法没有加PBS，不知道这个步骤是否有影响

汀雅 · 发表于 2021-7-28 09:00:26

tiger 发表于 2021-7-27 12:18
这两种方法都不能洗，结果很怪异。并且体积法CD3+CD19超出了100%

是的，两种方法我都没有洗涤，也是没有见过这种结果，觉得很奇怪

汀雅 · 发表于 2021-7-28 09:03:14

bslhk 发表于 2021-7-27 11:22
这两种方法计数结果可能有差异，但是不应该出现你说的一个有2个峰一个有三个峰。你可以先用体积法测，完后 ...

好的，我下次再按照您说的来试一试

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