BD Annexin V-FITC/PI 凋亡检测，实验组无早凋只有晚凋

逗逗

各位老师好：

    近期进行凋亡实验，遇到了一些小问题，想请教老师们，万分感激。

    我的实验已重复三次，每次的结果都是实验组只有晚凋没有早凋。

    实验步骤如下：1.铺板24h后，药物诱导细胞凋亡；

                          2.24h后，PBS洗两遍，胰酶（无EDTA）消化，1200rpm，3min，收集细胞

                          3.PBS洗两遍，1200rpm，3min，收集细胞

                          4.10x Binding Buffer用双蒸水稀释为1x Binding Buffer，取100ul加入细胞中混匀，先后加入5ul FITC、5ulPI常温避光共孵育15min，上机

    结果如下：第一排依次为空白组，FITC单染、PI单染；第二排依次为实验组1，实验组2，实验组3

    问题1：为什么实验组几乎没有早凋，只有晚凋？在网上检索时发现，因为PI有毒性，有的试剂盒PI是临上机前5min再加，和这个有关吗？BD试剂盒的说明书中这两个染料是一块加的。

    问题2：为什么实验组上机后，信号很高，原本调好参数，设置在10^3左右的十字门需要重新调整？

tiger

把培养上清一起收了。

逗逗

tiger 发表于 2021-8-2 15:52
把培养上清一起收了。

有一次的实验收过，结果也差不多

lulixian669

PI使用percp通道吗，我记得好像用PE好一些吧

niwanmao

先减少PI孵育时间看看。

十字门的位置我觉得还是合适的。