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发表于 2021-8-5 03:00:23
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本帖最后由 zxt2009 于 2021-8-5 03:09 编辑
①对的，我记得好像倪老师您提到过，Q3才是严格意义上的凋亡群体，Q2因为混入了PI，所以无法区分晚凋与坏死。
Q1的信号不多，可能和我PI染色时间有关，我是AV-FITC染色15分钟，然后再加入PI染色液，染色5分钟，再上机，不像其他人，可能染色时间更长点，也许Q1信号会多点，我的PI单染组还是没问题。另外就是这个公司试剂盒，提供的过去使用者的贴壁细胞图片作为参考，也是Q1象限细胞损失很少。
②关于贴壁细胞处理，我之前发过帖子，就是提问到正常组Q3假阳性太多，这个问题困扰了我许久，最后我在赛默飞官网找到了一个技巧：贴壁消化后，用完全培养液再继续37℃重悬培养细胞30分钟，减少因消化带来的PS外翻假阳，我这次尝试后，发现正常组相对理想了很多。还有就是一定要选试剂质量过硬公司的凋亡试剂盒，钱多几百元但是一次成功，实际上反而能节约科研经费，因为培养细胞或者收集细胞也是需要耗材和其他试剂的。
③最后还有个问题想问一下倪老师，我是用的无EDTA的胰酶消化细胞，消化时间很长，大约要9分钟（平时带EDTA胰酶只需要2分钟），才能勉强大部分消化下来，我能否用含EDTA胰酶消化，然后再用结合Buffer缓冲液冲洗1-2次，这样消化时间短点，也许能减少Q3的细胞量？我镜下观察，发现在长达9分钟的消化过程中，还是有些细胞顶不住，漂起来了，或者可能从早凋转向了晚凋。
您觉得这样减少消化时间，然后多1-2次离心，可以接受吗？
最后再次感谢您的帮助和耐心指导。
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发表于 2021-8-4 00:57:15
发表于 2021-8-4 07:38:53
