流式分选后检测阳性细胞的阳性率，纯度只有30%

bingqiongyu · 发表于 2021-8-9 17:04:23

CD8+细胞经过CD137流式分选后，取分选后的阳性细胞进行流式检测，若按照分选前细胞阳性率画门，分选后的细胞其阳性表达只有30%（理论上应90%以上），请问这个数据正常吗？怎么解释？

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分选前细胞CD137表达分选后阳性细胞分选后阴性细胞

bingqiongyu · 发表于 2021-8-9 17:05:52

这个是图片

bslhk · 发表于 2021-8-10 08:16:26

应该分选的设置有问题，延迟计算出问题了，加电加错了。你再校准一下，再看看结果。

bingqiongyu · 发表于 2021-8-10 10:02:21

bslhk 发表于 2021-8-10 08:16
应该分选的设置有问题，延迟计算出问题了，加电加错了。你再校准一下，再看看结果。 ...

这个检测不是在分选仪器上做的，是分选完后，取细胞在另外一台分析型流式上做的检测，补偿也调好了，电压应该也没有问题

bslhk · 发表于 2021-8-10 10:18:31

bingqiongyu 发表于 2021-8-10 10:02
这个检测不是在分选仪器上做的，是分选完后，取细胞在另外一台分析型流式上做的检测，补偿也调好了，电压 ...

你是分选后回测纯度不够，这个可能是你的延迟计算有问题，加电的时候没有加对，这样分选的液滴里面不是你的目的细胞。

liuruiluna · 发表于 2021-8-10 14:20:28

本帖最后由 liuruiluna 于 2021-8-10 14:23 编辑

用的是什么荧光素的抗体？从分选开始到上机检测纯度，隔了多长时间？分选前的细胞的图也是在做纯度验证的那台机器上看的么？FSC SSC的细胞是怎样的？如果是drop delay 做的不准，在FSC SSC上的细胞，就不会太集中，到处都是，如果在FSC SSC 细胞就集中在一小团，可以考虑是不是荧光素有衰退的问题

bingqiongyu · 发表于 2021-8-10 15:52:03

bslhk 发表于 2021-8-10 08:16
应该分选的设置有问题，延迟计算出问题了，加电加错了。你再校准一下，再看看结果。 ...

这个是用美天旎的流式分选仪做的，不是BD或者贝克曼的，分选原理不同，这个没有给细胞加电压呢，不太明白您什么意思，能说详细点吗

liuruiluna · 发表于 2021-8-10 16:38:55

bingqiongyu 发表于 2021-8-10 15:52
这个是用美天旎的流式分选仪做的，不是BD或者贝克曼的，分选原理不同，这个没有给细胞加电压呢，不太明白 ...

流式分选仪应该无论是哪个公司的，都涉及到drop delay的验证问题，如果这个不准，纯度就会不对。

bingqiongyu · 发表于 2021-8-10 16:39:10

liuruiluna 发表于 2021-8-10 14:20
用的是什么荧光素的抗体？从分选开始到上机检测纯度，隔了多长时间？分选前的细胞的图也是在做纯度验证的那 ...

PE的荧光素，隔了2h，FSC SSC细胞比较集中

liuruiluna · 发表于 2021-8-10 16:42:20

bingqiongyu 发表于 2021-8-10 16:39
PE的荧光素，隔了2h，FSC SSC细胞比较集中

我觉得你完全可以用你分选的仪器，直接拿分选出来的细胞，吸出来一点点，直接用那个模板跑一下，看纯度就可以了。以前我们基本就是分选完了直接用这个细胞用这个分选仪充分冲洗了机器之后，跑一下，不需要另换成分析仪

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