流式诊断血小板疾病

niwanmao

用针对表面膜糖蛋白的抗体标记血小板，然后通过流式细胞术分析，是一种快速而灵敏的血小板功能检测技术。 适用于全血、PRP或洗涤过的血小板。 全血需要的样本量很少，因此特别适合新生儿。

流式细胞术在血小板疾病中的适用场景包括
- 监测 GpIIb/IIIa 拮抗剂治疗效果
- 血小板表面糖蛋白遗传缺陷的诊断
- 贮存池病（storage pool disease）的诊断
- 肝素诱导的血小板减少症的诊断
- 斯科特综合征的诊断
等等


全血流式细胞术克服了PRP样本的许多固有问题：

- 更能反映生理功能
- 由于样本操作步骤很少，所以血小板人为活化能够最小化
- 可以同时分析多个血小板受体
- 新的抗体可以很容易地纳入现有的方法
- 只需要少量血液
- 可用于有明显血小板减少症的患者

我们一般采用三种针对特定血小板膜糖蛋白的抗体 [CD41、CD61 和 CD42b]，CD41 识别血小板膜糖蛋白 GPIIb（即整合素α IIb 链，它与 GpIIIa「整合素β3 链」非共价结合以形成 GpIIb/IIIa 复合物）；CD61 识别血小板膜糖蛋白 GpIIIa（整合素β3 链）；CD42b 与巨核细胞和血小板上的 GPIb 反应，CD42b 还抑制瑞斯托菌素依赖的血管性血友病因子（von Willebrand factor， vWF）与血小板的结合和瑞斯托菌素诱导的血小板凝集。


1. 正常血小板：在图1中，正常血小板是根据前向和侧向光散射选择的，并以绿色圈出。 在图2和图3 中，正常血小板呈CD41 (GPIIb) 和 CD61 (GPIIIa) 、CD42b (GPIb) 阳性：


2. 血小板无力症（Glanzmann's Thrombasthenia）：在图5和6可见，该患者的血小板CD41、CD61均阴性，说明缺失GPIIb/IIIa复合物，这是血小板无力症的特征。 不过，在图6中可见其CD42b是正常的。


3. 巨大血小板综合征（Bernard Soulier Syndrome）：
这里的设门跟前面略有不同，采用CD61圈出血小板。在下图1中，通过CD61/SSC圈血小板，然后图2和图3，可见其CD41和CD42b均表达正常，说明血小板存在正常的GPIIb-IIIa 和 GPIb 受体.


在下图5、6、7则是巨大血小板综合征的患者，该患者的CD41和CD61正常，表明GPIIb-IIIa受体复合物表达正常，但在图6中，有两类血小板，一类（占总血小板的53％）CD61和CD42b均正常，这些是输注到患者体内的正常血小板，而另一类（占47％）则是CD42b（GPIb受体）缺失，是患者自身的血小板。




备注
1. 流式细胞术可用于只有少量血液（如新生儿）时。
2. 与成人血小板相比，静息新生儿血小板的 GPIIb/IIIa 受体表达明显降低。 然而，新生儿血小板显示 GPIa/IIa 和 GPIb 受体表达正常。
3. 流式细胞术也可以通过分析Annexin V与血小板膜磷脂的结合来筛查Scott综合征。
4. 血小板活化可以通过CD62P（即P Selectin，α颗粒膜的一种成分）或 CD63（血小板致密颗粒和溶酶体膜的整合蛋白）检测。
5. 血小板微颗粒可通过流式检测，在止血方面越来越受到关注。
6. 根据 GPIIb/IIIa 的表达，血小板无力症患者通常被分为 1-3 型。
1型：<5% GPIIb/IIIa 表达
2型：5-20% GPIIb/IIIa 表达
3型：GPIIb/IIIa表达正常，但有其它功能失调受体


信源：https://practical-haemostasis.co ... flow_cytometry.html

ddhhyyddhh

倪老师 文章里面的流式图被水印挡住了，能否重新上传，谢谢。

niwanmao

ddhhyyddhh 发表于 2021-11-10 10:12
倪老师 文章里面的流式图被水印挡住了，能否重新上传，谢谢。

已纠正。