LLOB、LLOQ是啥？如何做好这些质控指标？

niwanmao

空白/检测下限
英文名为Lower limit of blank/detection，简称LLOB或LLOD。

如果将 FMO/FMx 样本用于 LOB/LOD，则不需要单独的实验。

至少应使用 10 个数据点。请注意，并非所有的流式实验都需要建立 LOB/LOD，在许多情况下，LLOQ 就足够了。

如果预计检测不会检测到罕见事件，则可能不需要 LOB/LOD 或 LLOQ。

请注意，一旦确定了 LOB/LOD，就不应在其他验证参数（精度、稳定性、LLOQ）的计算中使用低于 LOD 的数据。数据不能从验证记录中删除，但应显示为< LOD。每个实验室都需要决定如何报告< LOD 数据，但是，需要明确的是，低于检测下限的数据，不应被视为有任何意义。

需使用的样本数：10

需重复的次数：1次或更多

需要的仪器数：1

需要的操作者数：1

统计学处理：记录 LOB/LOD 相关的主要群体的事件和/或相对百分比（可报告的结果）；LOB=计算平均值（所有样本）+ 1.645 SD；LOD= 计算平均值（所有样本）+ 3 SD

验收标准：LOB/LOD 没有验收标准。此参数仅供参考。

定量下限 (LLOQ)
英文全称Lower Limit of Quantification，简称LLOQ。

如果预计检测不会检测到罕见事件，则不一定要建立 LLOQ。请注意，一旦 LLOQ 确定，低于 LLOQ 的数据不应用于其他验证参数（精密度、稳定性等）的计算。数据不能从验证记录中删除，但应显示为< LLOQ。每个实验室都需要决定如何报告< LLOQ 数据，但是，需要明确的是，低于定量下限的数据，不应被视为有任何意义。

需使用的样本数：15（三名供者样本，每个样本需有5个浓度点）

需重复的次数：3

需要的仪器数：1

需要的操作者数：1

统计学处理：记录 LLOQ 相关的主要群体的事件和/或相对百分比（可报告的结果）；标记所有< LOD的值； 计算每个样品的每个可报告结果的平均值、SD 和 %CV，其三次重复均> LOD 并且事件数量大于每个实验室确定的最小值。请注意，尽管一些出版物建议最少应在 20-50 个事件的范围内，但每个实验室都应根据验证数据和数据的预期用途设定自己的限制（Rawstron 等，2008）。

数据评估和验收标准：查看事件和/或相对百分比的数据表。 LLOQ指的是所有三个供者样本都满足以下标准时的最低浓度：（1）所有三次重复值均> LOD ◦ （2）所有三次重复都存在最少事件数 ◦ （3）滴定结果与稀释比例大致成线性◦

LLOQ 的临界值由每位研究人员基于数据的预期用途自行决定，但> 30%-35% CV 的数据可能会受到质疑。

批内精密度
英文全称是Intra-Assay Precision。也就是重复性（repeatability）。

见图：


需使用的样本数：3~6

需重复的次数：3

需要的仪器数：1

需要的操作者数：1

统计学处理：计算每个（单个）样品的每个可报告结果的平均值、SD 和 %CV，其中所有三个重复均> LLOQ（如果已建立）；计算所有样本的每个可报告结果的 %CV 平均值（平均 %CV）。然后通过平均 %CV 和范围来描述精度。

验收标准： CV需要控制在10%，最高 25%CV 也是可以接受的；当群体或抗原不太明确（罕见事件）时，30%-35% 的 CV 是可以接受的；只要平均 %CV 满足标准，就不必每个样品都满足标准。如果一个样品不符合验收标准，应在验证报告中说明原因。

批间精密度
英文全称Inter-Assay Precision。即重现性（Reproducibility)。

见图：


需使用的样本数：2~3

需重复的次数：3

需要的仪器数：1

需要的操作者数：1

统计学处理：对于每个可报告的结果，计算每个样本的 %CV（从所有运行的平均值计算）的平均值（平均 %CV）。每个可报告结果的分析间精密度应以平均 %CV 和 CV 范围报告。

验收标准：需要 10% 的 CV，当群体或抗原不太明确时，最高 25% 的 CV 是可以接受的。对于罕见事件，30-35% 的 CV 是可以接受的。

信源：Selliah, N., Eck, S., Green, C., Oldaker, T., Stewart, J., Vitaliti, A., & Litwin, V. (2018). Flow cytometry method validation protocols. Current Protocols in Cytometry, e53. doi: 10.1002/cpcy.53