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[归档] BODIPY™ 581/591 C11 D3861

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 楼主| 发表于 2021-10-13 09:57:44 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
近几天用thermo的BODIPY™ 581/591 C11   D3861做了一下流式,因为这边条件有限,选择的是用488nm激发的FITC和PE通道进行检测的,结果显示对照组,处理组和阳性组(铁死亡诱导剂Erastin诱导组)之间都没有区别,不知道是机器原因,还是自己实验方法不行,现在就不知道如何改善,有没有人做过相关实验的能帮我解决一下吗。

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发表于 2021-10-13 12:21:32 | 显示全部楼层
不知道你的实验步骤和图分别 怎么样的。

对照组应该是不加处理药物也不加erastin,只加了BODIPY?
erastin一般孵育6小时。然后再加bodipy。
上机获取FITC通道信号,将阴性对照组和阳性信号叠加,可见到阳性信号有明显的偏移。
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发表于 2021-10-15 10:43:04 | 显示全部楼层
BODIPY™ 581/591的光谱如下,488 nm激光器好像确实激发不了。建议用荧光显微镜或者激光共聚焦观察一下有没有荧光,没有荧光的话,还是换一个染料吧。
图片1.png
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发表于 2021-10-15 21:12:24 | 显示全部楼层
wxd 发表于 2021-10-15 10:43
BODIPY™ 581/591的光谱如下,488 nm激光器好像确实激发不了。建议用荧光显微镜或者激光共聚焦观察一下有没 ...

文献中是有用488通道检测的,应该是可以。
感觉楼主的问题可能还是步骤的问题可能性大。
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 楼主| 发表于 2021-10-16 09:03:00 | 显示全部楼层
谢谢前辈们的回复,我对照组是没有经过任何处理只加了BODIPY的,erastin我是孵育了24h再加BODIPY然后上机检测的,结果我放在图片中了。
QQ截图20211016085859.png
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发表于 2021-10-16 09:08:26 | 显示全部楼层
zhuzhuwen 发表于 2021-10-16 09:03
谢谢前辈们的回复,我对照组是没有经过任何处理只加了BODIPY的,erastin我是孵育了24h再加BODIPY然后上机检 ...

有还是有的,Erastin那组看到一个峰。但是不够明显。

建议你同样的方式,先再重复多次看看。另外,24小时会不会太长?
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 楼主| 发表于 2021-10-16 10:22:26 | 显示全部楼层
有的文献上Erastin是处理24h,也有6h,2h的我后面将处理时间缩短一点看可以不可以。还有一个问题就是,我的对照组的荧光信号强度为什么也那么高,我看文献中都会在10^1-10^3之间,而我的直接超过10^3了。
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 楼主| 发表于 2021-10-16 10:49:26 | 显示全部楼层
我也用铁死亡抑制剂liproxstatin-1进行了回复实验,结果也没有变化,愁死我了
图片1.png
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发表于 2021-11-16 15:17:46 | 显示全部楼层
zhuzhuwen 发表于 2021-10-16 10:49
我也用铁死亡抑制剂liproxstatin-1进行了回复实验,结果也没有变化,愁死我了 ...

这个探针看起来是没有问题的,建议加大erastin的浓度,缩短药物处理时间。我用RSL3做诱导,处理时间大概在5个小时左右,是可以看到明显的峰右移的
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