BODIPY™ 581/591 C11 D3861

zhuzhuwen

近几天用thermo的BODIPY™ 581/591 C11   D3861做了一下流式，因为这边条件有限，选择的是用488nm激发的FITC和PE通道进行检测的，结果显示对照组，处理组和阳性组（铁死亡诱导剂Erastin诱导组）之间都没有区别，不知道是机器原因，还是自己实验方法不行，现在就不知道如何改善，有没有人做过相关实验的能帮我解决一下吗。

niwanmao

不知道你的实验步骤和图分别 怎么样的。

对照组应该是不加处理药物也不加erastin，只加了BODIPY？
erastin一般孵育6小时。然后再加bodipy。
上机获取FITC通道信号，将阴性对照组和阳性信号叠加，可见到阳性信号有明显的偏移。

wxd

BODIPY™ 581/591的光谱如下，488 nm激光器好像确实激发不了。建议用荧光显微镜或者激光共聚焦观察一下有没有荧光，没有荧光的话，还是换一个染料吧。

niwanmao

wxd 发表于 2021-10-15 10:43
BODIPY™ 581/591的光谱如下，488 nm激光器好像确实激发不了。建议用荧光显微镜或者激光共聚焦观察一下有没 ...

文献中是有用488通道检测的，应该是可以。
感觉楼主的问题可能还是步骤的问题可能性大。

zhuzhuwen

谢谢前辈们的回复，我对照组是没有经过任何处理只加了BODIPY的，erastin我是孵育了24h再加BODIPY然后上机检测的，结果我放在图片中了。

niwanmao

zhuzhuwen 发表于 2021-10-16 09:03
谢谢前辈们的回复，我对照组是没有经过任何处理只加了BODIPY的，erastin我是孵育了24h再加BODIPY然后上机检 ...

有还是有的，Erastin那组看到一个峰。但是不够明显。

建议你同样的方式，先再重复多次看看。另外，24小时会不会太长？

zhuzhuwen

有的文献上Erastin是处理24h，也有6h，2h的我后面将处理时间缩短一点看可以不可以。还有一个问题就是，我的对照组的荧光信号强度为什么也那么高，我看文献中都会在10^1-10^3之间，而我的直接超过10^3了。

zhuzhuwen

我也用铁死亡抑制剂liproxstatin-1进行了回复实验，结果也没有变化，愁死我了

qihao309

zhuzhuwen 发表于 2021-10-16 10:49
我也用铁死亡抑制剂liproxstatin-1进行了回复实验，结果也没有变化，愁死我了 ...

这个探针看起来是没有问题的，建议加大erastin的浓度，缩短药物处理时间。我用RSL3做诱导，处理时间大概在5个小时左右，是可以看到明显的峰右移的

Lhappy233

各位老师，关于BODIPY染料请教一下，我目前做铁死亡，也是用erastin处理，其中显微镜下看实验组出现了明显的细胞死亡（漂了），但是BODIPY染色感觉没什么差异，下图分别是我的圈门策略，和两组FITC通道上的信号，能请各位老师指点一下吗。我利用对照组（只加BODIPY不加其他）来调FITC通道上的电压，需要调电压这一步吗？