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[流式分选] 分选后细胞上的抗体怎么去除?

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 楼主| 发表于 2021-10-19 09:24:08 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
各位老师,

我们在做一个项目,想把PBMC中表达靶点的细胞给分选出来,然后看我们自己的抗体能不能有药效。
现在又一个问题是如果用靶点抗体分选,分选后的已经有抗体结合在细胞上,可能有竞争,我们自己的抗体就上不去了,所以请问有好的方法去除分选后细胞上的荧光抗体吗?

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发表于 2021-10-19 12:19:59 | 显示全部楼层
从目的看我觉得你们可以换一个受体占位的思路试一试。绕过分选这一步。
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 楼主| 发表于 2021-10-19 12:44:58 | 显示全部楼层
司徒随风 发表于 2021-10-19 12:19
从目的看我觉得你们可以换一个受体占位的思路试一试。绕过分选这一步。

因为是做研发的 有几十个抗体待测,都和待测抗体不竞争有点难
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发表于 2021-10-20 14:44:35 | 显示全部楼层
H4nn1 发表于 2021-10-19 12:44
因为是做研发的 有几十个抗体待测,都和待测抗体不竞争有点难

可以试试0.1 M 甘氨酸•HCl,pH 2.5-3.0
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发表于 2021-10-23 20:23:16 | 显示全部楼层
很难去除的。只能试试。。。。
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发表于 2021-10-24 15:27:24 | 显示全部楼层
在谷歌上还找到另一个解决方案,感觉可能有一定作用,翻译供参考:
FACS 分选后,将收集的细胞与 10 ml 完整细胞培养基在 37℃ 下孵育 10-15 分钟,轻轻摇动并离心。再次用 10 ml 完全细胞培养基溶解沉淀并在 370°C 下孵育 10-15 分钟,轻轻摇动并离心。如此重复此步骤五次。
通过上述每个洗涤步骤,每次都能去掉部分抗体,唯一的缺点是可能也会丢掉一些细胞。
注意:不要忘记将培养基预热到 37 度 。
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 楼主| 发表于 2021-10-27 09:57:14 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-10-24 15:27
在谷歌上还找到另一个解决方案,感觉可能有一定作用,翻译供参考:
FACS 分选后,将收集的细胞与 10 ml 完 ...

倪老师,这个方法我们尝试过了 并不可行,我们重复了5次洗的步骤也没有任何区别
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发表于 2021-10-27 17:35:41 | 显示全部楼层
插眼  我也想知道
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