关于血小板活化和聚集功能检测

dingjing

各位老师好，本人实验室小白一枚，近期在做有关血小板活化及聚集功能检测，活化功能采用的是CD41、CD62p、CD63抗体进行标记，聚集功能使用的CD14、CD41进行标记。但似乎检测结果表达率不是很理想，请各位老师帮忙分析一下？谢谢！

niwanmao

你这里认为不理想的评价标准是什么？

dingjing

niwanmao 发表于 2021-11-1 08:34
你这里认为不理想的评价标准是什么？

倪老师您好，我参考过既往关于血小板活化和聚集能力测定类似的研究，国内国外的文献都了解过。在实验条件类似的情况下，对比他们最后给出来的数据，发现自己目前做的均值跟他们差别很大，我的样本总体是表达率偏低的。虽然知道没有用过激动剂血小板的活化表达不高，但是感觉自己的实验组和对照组都特别低。上图是其中一份样本，表达算相对较高的，其余的样本，CD62P CD63大概只有1%左右。而血小板聚集（CD14 CD41双阳表达）普遍特别高，60%-80%间。既往文献，在实验和对照基线类似的情况下，血小板活化大概都是在20%左右（同样不用激动剂的情况下）。因为自己是用全血做的，不知道是不是用PRP会好一点？请倪老师加以指点

niwanmao

dingjing 发表于 2021-11-1 21:44
倪老师您好，我参考过既往关于血小板活化和聚集能力测定类似的研究，国内国外的文献都了解过。在实验条件 ...

血小板我自己没怎么做过，没法给你非常具体的指导，之前编译过一篇文献，你可以从这些步骤中找找看自己目前的方法是否存在什么缺陷？

血小板活化、染色和分析
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3905-1-1.html
(出处: 流式中文网)

overcome1996

这里CD14表征的是单核细胞-血小板聚集？

niwanmao

overcome1996 发表于 2021-11-10 15:28
这里CD14表征的是单核细胞-血小板聚集？

CD14和CD41共表达

overcome1996

niwanmao 发表于 2021-11-10 19:15
CD14和CD41共表达

倪老师，请问这里讲的聚集指的是血小板-白细胞（单核细胞）聚集吗？我在pubmed上查到关于CD14和CD41共表达的情况(共10篇文献)都是表征这一参数。另外，对比静息状态的血小板，剪切力诱导能使血小板聚集(圈出CD61+后，通过FSC-H和FSC-A，即排粘连体的方式衡量聚集)。不知这种方式衡量的聚集是否科学。

niwanmao

overcome1996 发表于 2021-11-10 23:50
倪老师，请问这里讲的聚集指的是血小板-白细胞（单核细胞）聚集吗？我在pubmed上查到关于CD14和CD41共表 ...

是的，血小板和白细胞聚集提示了血小板体内活化水平。至于您所说的剪切力导致的人为活化，这是平时检测中需控制的一个因素，这也是为什么这个检测难做和难以标准化的原因，但是意义还是有的。

dingjing

niwanmao 发表于 2021-11-2 12:52
血小板我自己没怎么做过，没法给你非常具体的指导，之前编译过一篇文献，你可以从这些步骤中找找看自己目 ...

倪老师，我用全血做血小板活化表达，CD41阳性率比较低，后面咨询了一下老师说是可以将新鲜全血静置20min左右吸取血浆和红细胞中间层血小板进行孵育。因为我不加激动剂，又怕做PRP会在离心的时候人为血小板活化掉。这样做结果出来确实提高了CD41表达，但是不知道这样是否符合规范？

niwanmao

dingjing 发表于 2022-2-27 16:52
倪老师，我用全血做血小板活化表达，CD41阳性率比较低，后面咨询了一下老师说是可以将新鲜全血静置20min ...

41应该是不受活化影响，CD62P、CD63才是主要的。