外周血T淋巴亚群，CD3+CD4-CD8-比例很高，不知道哪的问题。

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做了差不多十多例的外周血淋巴亚群，检CD3/CD4/CD8/CD56几个指标。
原则上来说，CD3的比例应该与CD4+CD8差不多。可我做的全部都是CD3+比例比CD4+加CD8+的高10%---20%。
以为是溶血没做好，红细胞干扰的问题，又加了CD45，发现淋巴群都是白细胞，几乎没有红细胞。
但就是有10%---20%的CD3+CD4-CD8-细胞。
用的是不同的样本，也用了不同的抗体，一套BD的，一套国产的，都差不多，都是CD3+CD4-CD8-比例高。
实在是找不到原因了，求助大佬。

zhaoyumeng

能不能问一下您这边的血样是新鲜的还是从冰箱里拿出来直接使用的？之前出现过冰箱里直接拿出来使用的血样CD4+、CD8+表达都偏低了，恢复至室温再进行实验值表达均有所上调

niwanmao

之前帖子看不到是因为你把图片直接拖到框里，变成了编码，导致整个帖子过大，无法显示。
现已帮你纠正，下次上传图片，记得用工具栏上的“上传图片”按钮，不要再直接拖了。

你这里的图，都没有用CD4/CD8散点图，所以无法确认你说的是否真的CD4-CD8-T细胞，因为从你这里的CD3染色看，分得并不好。

Merci

CD8分群都不怎么好，肯定会有差异，把CD3+CD4+细胞群改一下颜色，看看CD8分群是不是有重叠

niwanmao

zhaoyumeng 发表于 2021-11-23 16:50
能不能问一下您这边的血样是新鲜的还是从冰箱里拿出来直接使用的？之前出现过冰箱里直接拿出来使用的血样CD ...

这主要是由于样本温度未升高，此时与抗体的孵育，就得延长时间。

zhaoyumeng

niwanmao 发表于 2021-11-25 09:40
这主要是由于样本温度未升高，此时与抗体的孵育，就得延长时间。

那下回延长一下孵育时间，谢谢倪老师

Climber

根据我做小鼠的经验，您先去一下黏连细胞（FSC-A/H）,然后先用CD3把T cell圈出来，小鼠在某些炎症模型下，CD3分群并不好，此时可改用CD5或TCRb，但CD5目前一些大的期刊并不认可，但CD5分群效果最好，然后再用CD4 CD8进行分群，此时即可见是否有CD4CD8 DN细胞群，另外您的CD3-FITC的坐标左侧都没显示完全，可以稍微调整下，阳性群的荧光值也才10^3附近 可以稍微降低点抗体稀释比例

半年y

你这没有进入CD3的门去看CD4CD8，怎么判断的CD3+CD4-CD8-的比例？

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半年y 发表于 2021-12-1 14:58
你这没有进入CD3的门去看CD4CD8，怎么判断的CD3+CD4-CD8-的比例？

因为 我看了啊，我没发图啊

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niwanmao 发表于 2021-11-25 09:40
这主要是由于样本温度未升高，此时与抗体的孵育，就得延长时间。

4度冰箱里拿出的，而且孵育过程也是在4度。