光谱流式与质谱流式的区别

Veblen

想请问一下光谱流式与质谱流式的区别？以及各自的优势有哪些呢？

niwanmao

简单地说，光谱无补偿是建立在光谱图形的智能学习上，从算法上进行拆分实现的，能识别自发荧光等干扰，在试剂方面良好的继承了现有荧光流式试剂，所以过渡较为平滑，但是据目前所了解到的知识点，光谱流式的荧光素光谱图形，需要定期重复学习，尤其是串联染料，不同批次可能需要重复习性。

质谱流式是真正的无补偿，无需拆分光谱，因此信号更为可靠，但是试剂需要另外购买或自己耦联重金属，个别标记区分度不如荧光流式。

Veblen

niwanmao 发表于 2021-11-21 09:29
简单地说，光谱无补偿是建立在光谱图形的智能学习上，从算法上进行拆分实现的，能识别自发荧光等干扰，在试 ...

谢谢老师，明白了，总结到位。

wmj123456

Veblen 发表于 2021-11-22 10:40
谢谢老师，明白了，总结到位。

倪老师，我想知道在质谱流式中，最后是如何确定细胞类型而聚类的？我的理解是这样的，做质谱流式的时候，先用同位元素标记抗体，通过质谱的手段确定同位素的类型后，根据同位素类型确实是哪个抗体，然后就可以确实是哪种细胞类型了？

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-8-28 16:46
倪老师，我想知道在质谱流式中，最后是如何确定细胞类型而聚类的？我的理解是这样的，做质谱流式的时候， ...

我是这么理解的，不知道对不对，大家来讨论一下：
常规流式一个个细胞排队进流动室激发，质谱流式你可以想象成一个个细胞排队进入气化室，其中的时间是控制什么蛋白对应什么细胞的关键参数，所以质谱速度提高不上去。

wxd

普通流式是通过检测通过流动室的细胞所带的荧光的颜色来识别荧光标记的抗体，通过检测对应的荧光强度来检测细胞表面抗原的表达量，进而识别细胞并进行归类的。比如我们要检测外周血中Treg的比例，我们需要anti-CD45-FITC、anti-CD3-PE、anti-CD4-PC5、anti-CD25-APC和anti-Foxp3-BV421，如果一个典型的Treg出现在流动室，它应该在经过633 nm光路的时候有红色荧光，经过488 nm光路的时候有绿色、黄色和红色荧光，经过405 nm激光器的时候有蓝色荧光，对应的荧光强度代表其抗原的表达量。因为流式细胞仪在出厂时已经调校好了细胞经过不同激光器光路的时间间隔，所以经过算法，可以将经过不同激光器的细胞认为是一个，其所携带的荧光颜色以及对应的荧光强度也会被记录在一个细胞上，像这样检测上万个细胞之后，就可以对其进行分群分析了。
质谱流式是通过识别不同同位素的荷质比来识别荧光标记的抗体，通过检测对应的同位素的数量来检测细胞表面抗原的表达量，进而识别细胞并进行归类的。还以Treg为例，一个典型的Treg细胞经同位素抗体标记后，出现在气化室，应能检测到5种对应同位素的粒子，对应的同位素数量代表其抗原的表达量。

wmj123456

wxd 发表于 2023-8-29 09:36
普通流式是通过检测通过流动室的细胞所带的荧光的颜色来识别荧光标记的抗体，通过检测对应的荧光强度来检测 ...

明白了，谢谢两位老师的解答