PBMC刺激后阴阳性MFI值异常

司徒随风

LPS刺激后分析DC成熟markerCD80、MHCII数据分析圈门
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-7869-1-1.html
(出处: 流式中文网)
与这个实验类似，我们用的是含LPS和R848混合PBMC完全培养基刺激24H，阴性为PBMC完全培养基，刺激后染死活后染CD14，CD86，上机发现阴性MFI是阳性的两倍左右，有没有大佬帮忙分析一下。

niwanmao

阴性对照，应该是同样的R848混合且经LPS刺激的PBMC细胞，只是染色时，分别只染CD86或只染CD14，分别用于CD14和CD86的设门。

司徒随风

倪老师您好
    我们目前是使用CD14+和HLA-DR+确定我们的目标细胞亚群，使用刺激后的细胞分别加入CD86抗体和Isotype作为阳性和阴性圈门依据，目前观测到的是PE通道影响FITC通道，已经略微调整了相应的补偿（PS：因为我们是四激光仪器，CD86（PE）使用561激光、HLA-DR（APC）使用638激光，CD14（FITC）使用488激光、死活染料（KO525）405激光）
麻烦您帮忙看看，谢谢

niwanmao

司徒随风 发表于 2021-12-2 09:48
倪老师您好
    我们目前是使用CD14+和HLA-DR+确定我们的目标细胞亚群，使用刺激后的细胞分别加入CD86抗体 ...

图呢？

司徒随风

老师，我们后期查文献，换了CD25基本上解决了这个问题，谢谢老师的热心回复。