小鼠T细胞活化后流式检测相关问题

wgz2414 · 发表于 2021-12-6 10:02:39

小鼠T细胞用CD3/CD28抗体活化后流式检测GPF的强度，发现随着培养时间的延长（两次检测相隔4天）细胞GPF的强度有所增强，请问这是什么原因

niwanmao · 发表于 2021-12-6 11:03:05

活化后，FSC和SSC是否也都有所增大？如是，则可能活化后的非特异性荧光导致的增强。

wgz2414 · 发表于 2021-12-22 22:17:55

是的，FSC和SSC都有所增大。倪老师，我是想通过GFP检测病毒转导T细胞的效果，如果未转导病毒的T细胞非特异性荧光很高那么背景就会很高，相应的转导过病毒的T细胞检测到的阳性率就会偏低，请问有什么方法可以纠正吗？

niwanmao · 发表于 2021-12-23 07:47:32

wgz2414 发表于 2021-12-22 22:17
是的，FSC和SSC都有所增大。倪老师，我是想通过GFP检测病毒转导T细胞的效果，如果未转导病毒的T细胞非特异 ...

「未转导病毒的T细胞」有无转染过空载质粒？

wgz2414 · 发表于 2021-12-23 10:54:53

没有转染过

wgz2414 · 发表于 2021-12-23 11:07:07

niwanmao 发表于 2021-12-23 07:47
「未转导病毒的T细胞」有无转染过空载质粒？

没有转染过空载，这个T细胞只进行过活化没有做过其他任何处理

niwanmao · 发表于 2021-12-23 13:43:55

wgz2414 发表于 2021-12-23 11:07
没有转染过空载，这个T细胞只进行过活化没有做过其他任何处理

需要用空载质粒的。严格的对照，要使得其它因素都一致，仅留一种因素不同。

wgz2414 · 发表于 2021-12-23 16:48:00

niwanmao 发表于 2021-12-23 13:43
需要用空载质粒的。严格的对照，要使得其它因素都一致，仅留一种因素不同。 ...

倪老师，我们的空载也是带GFP的，所以我们都是用Blank-T细胞作对照检测阳性率。现在问题是Blank-T细胞培养久了之后会有非特异性的荧光出来，干扰了阳性率的检测

niwanmao · 发表于 2021-12-23 21:10:27

wgz2414 发表于 2021-12-23 16:48
倪老师，我们的空载也是带GFP的，所以我们都是用Blank-T细胞作对照检测阳性率。现在问题是Blank-T细胞培 ...

空载，需要那些不带荧光标记蛋白的。

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