小鼠MSC鉴定的指标比例不对

wmj123456

各位老师好，我提取小鼠后肾的msc细胞进行CD90-FITC和CD45-APC两个指标的鉴定，但是做了2次了，第一次是CD90的阳性比例是百分之十几，CD45的阳性比例是百分之二十几。第二次做的鉴定结果，比例也不符合MSC的鉴定要求，下图展示的是第二次培养3天后显微镜观察MSC的图形，以及流式结果。请大家帮忙看看是什么原因？

niwanmao

形态的图片太糊了。看不清。

流式图上，怎么这些细胞都在碎片区域呢？是不是获取条件有什么问题？

liuruiluna

FSC SSC电压大吧？ 这些也许不是细胞主群，可能是碎片

wmj123456

liuruiluna 发表于 2021-12-20 15:56
FSC SSC电压大吧？ 这些也许不是细胞主群，可能是碎片

我把细胞碎片去除了，重新圈门看CD90-FITC和CD45-APC 的比例，其实仍旧是不符合MSC的鉴定标准的。在流式染色前，做了细胞活力检测，大于90%。

niwanmao

wmj123456 发表于 2021-12-20 17:51
我把细胞碎片去除了，重新圈门看CD90-FITC和CD45-APC 的比例，其实仍旧是不符合MSC的鉴定标准的。在流式染 ...

染色前细胞活力好的话，可能性最大的就是处理时被弄碎了，可以找一下你的处理步骤中手法、裂解液、PBS等因素，逐一排查。

wmj123456

niwanmao 发表于 2021-12-20 18:03
染色前细胞活力好的话，可能性最大的就是处理时被弄碎了，可以找一下你的处理步骤中手法、裂解液、PBS等 ...

倪老师，您的意思是因为细胞破碎了，所以导致CD90阳性比例少？但是我第二次发的图是已经去掉碎片了，CD90的阳性比例还是不对呀，跟第一次没有去碎片的比例差不多，这个要怎么解释？

niwanmao

wmj123456 发表于 2021-12-20 21:11
倪老师，您的意思是因为细胞破碎了，所以导致CD90阳性比例少？但是我第二次发的图是已经去掉碎片了，CD90 ...

覆巢之下，焉有完卵。
既然细胞都碎了，其它信号虽然在细胞区域，您认为还是好的细胞吗？

bslhk

看的像是没有GATE到MSC上，调一下FS/ss电压，一般分析细胞电压不会太大。