单标管破膜后出现假阳性

tomwang

求助各位大佬，遇到一个想不通的假阳性问题。
我用的仪器是cytoflex，配色为：cd3-FITC cd4-Percp IFNr-APC，样本为小鼠的脾脏细胞。
当我上机后，发现结果特别奇怪；如第四张图所示，IFNr-APC 单标管与空白对照相比竟然在percp通道全部都为阳性，导致最后一张图，三标管的cd4没有分群，就是觉得很奇怪。
请问各位大佬，有可能是什么原因导致的？
图1为：空白 图2、3、4分别为cd3 cd4 IFNr的单标管，图5为样品管。

niwanmao

tomwang 发表于 2021-12-22 20:52
倪老师，请您再看一下，我的感觉，就是整个细胞群，不管是阴性还是阳性都会移动，应该不是补偿的问题。

...

你的方案里面是不是三个抗体？将他们相互之间的散点图都放出来看看吧。
假如真不是补偿引起的，那么这个仪器需要关注一下，是否存在不稳定现象，因为我们以前碰到过多次。

niwanmao

用散点图看两个通道之间的补偿。

tomwang

niwanmao 发表于 2021-12-22 15:17
用散点图看两个通道之间的补偿。

倪老师，请您再看一下，我的感觉，就是整个细胞群，不管是阴性还是阳性都会移动，应该不是补偿的问题。