流式分选细胞分群不明显，是不是消化不充分导致的？

ziniu9572 · 发表于 2021-12-22 21:39:40

如题，最近开始从脑组织制备样品做流式分选的预实验；第一次做的时候按照Protocol的条件6U/ml浓度中性蛋白酶II消化了15分钟，结果比较理想；但最近那个酶快用完了，所以就减少了浓度到2.4U/ml。然后发现做出来的流式结果没有明显的分群，染的荧光也看不到很好的信号。求问是不是酶浓度减少消化不充分导致的。

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ziniu9572 · 发表于 2021-12-22 21:47:00

第二次实验

这是第一次第二次的结果

niwanmao · 发表于 2021-12-23 07:48:55

ziniu9572 发表于 2021-12-22 21:47
这是第一次第二次的结果

没看懂，哪两张是第一次？然后APC究竟是什么指标？

ziniu9572 · 发表于 2021-12-23 11:36:23

niwanmao 发表于 2021-12-23 07:48
没看懂，哪两张是第一次？然后APC究竟是什么指标？

后两张是第一次，APC是S100B（一个星形胶质细胞的MARKER),用的间标（先孵一抗再敷二抗），二抗是Alexaflour647;第二次是前两张

ziniu9572 · 发表于 2021-12-23 11:38:22

niwanmao 发表于 2021-12-23 07:48
没看懂，哪两张是第一次？然后APC究竟是什么指标？

从整体细胞分布看，第一次有很明显的分群，但是第二次就没有

无事可乐 · 发表于 2022-3-3 20:14:10

打扰啦，请问您的问题有解决吗？我做人外周血的粒细胞，也是没有分群，跟您这张很像，不知道什么原因

niwanmao · 发表于 2022-3-3 20:36:25

无事可乐发表于 2022-3-3 20:14
打扰啦，请问您的问题有解决吗？我做人外周血的粒细胞，也是没有分群，跟您这张很像，不知道什么原因 ...

上面这是实体组织酶消化，所以酶的选择和消化的时间，对细胞影响很大。

而如果你做外周血也不好，三个可能性：一是裂解有问题，对细胞影响很大；二是样本本身活力不好；三是仪器未调好条件。

无事可乐 · 发表于 2022-3-3 22:44:42

niwanmao 发表于 2022-3-3 20:36
上面这是实体组织酶消化，所以酶的选择和消化的时间，对细胞影响很大。

而如果你做外周血也不好，三个可 ...

非常感谢倪老师，我再按照您的方法改进试试～

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[标本处理] 流式分选细胞分群不明显，是不是消化不充分导致的？