细胞周期modfit分析结果CV值过大

zhuw

使用cytoflex lx跑的流式，PE通道，fsc  ssc  pe的增益均设为20，觉得细胞去粘连后整体形态还可以，但是CV值都过大，是否是因为pe的增益值设得太大了，还是由于细胞处理过程中有问题呢

                               
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niwanmao

zhuw 发表于 2022-1-8 20:53
那在样品制备的过程中，还有哪些注意点可以帮助减小CV值呢，以及减小pe通道的增益值，是否对减小CV有帮助 ...

CV主要受获取样本时的速度、激光器校准这两个因素影响。
所以只要平时做好激光器的校准（仪器日常维护应该会报告这个指标的），获取的时候用低速获取，CV会小的。

zhuw

C:\Users\zhuwei\Desktop\招聘\1.png

niwanmao

zhuw 发表于 2022-1-6 22:27

CV会跟很多因素有关，上图中，主要与粘连体过多有关（5.37％），如果你已确认排除掉了，请将Aggregates关掉即可。

wxd

这个细胞周期，峰有点奇怪，楼主能不能详细说一下包括细胞处理、染色以及分析的步骤，好进行分析，或者上传一下fsc格式的文件，大家一起讨论一下。

zhuw

wxd 发表于 2022-1-7 13:03
这个细胞周期，峰有点奇怪，楼主能不能详细说一下包括细胞处理、染色以及分析的步骤，好进行分析，或者上传 ...

细胞使用的是hepG2 慢病毒稳转株，按照凯基的细胞周期试剂盒操作流程做的，12孔板铺板，消化离心pbs洗涤后，用75%乙醇固定4°过夜，第二天离心弃固定液，加入pi:RNase 9:1的工作液染色1小时，200目过筛后上机跑流式。

zhuw

niwanmao 发表于 2022-1-7 09:01
CV会跟很多因素有关，上图中，主要与粘连体过多有关（5.37％），如果你已确认排除掉了，请将Aggregates关 ...

老师您好，似乎把粘连的取消勾选后，CV值过大没有改善，我是否需要在调节荧光通道增益的时候，确保G1峰在某一个固定值附近？

niwanmao

zhuw 发表于 2022-1-7 21:47
老师您好，似乎把粘连的取消勾选后，CV值过大没有改善，我是否需要在调节荧光通道增益的时候，确保G1峰在 ...

看起来你的数据CV可能无法减小的，RCS已经足够好了。RCS我相对更看重一些，因为是反映曲线吻合度的。

zhuw

niwanmao 发表于 2022-1-8 10:56
看起来你的数据CV可能无法减小的，RCS已经足够好了。RCS我相对更看重一些，因为是反映曲线吻合度的。 ...

那在样品制备的过程中，还有哪些注意点可以帮助减小CV值呢，以及减小pe通道的增益值，是否对减小CV有帮助呢？

zhuw

niwanmao 发表于 2022-1-9 14:14
CV主要受获取样本时的速度、激光器校准这两个因素影响。
所以只要平时做好激光器的校准（仪器日常维护应 ...

后续重新再做了一次，一样的流程，把pe通道的增益值调小了一些，最后拟合出来的CV值就比较理想了