流式检测新冠抗体怎么做？

niwanmao

截至 2022年1月11日8点，由SARS-CoV-2大流行引起的COVID-19已导致全球超过551万人死亡 (https://www.worldometers.info/coronavirus) 。现已证明，病毒的Spike (S) 糖蛋白通过其受体结合结构域 (RBD) 与人血管紧张素转换酶 2 (ACE2) 结合，是病毒入侵的通路（Walls 等人 2020；Hoffmann 等人 2020）。 自大流行开始以来，学者们开发了一些可靠、灵敏和特异性的免疫吸附测定法，以确认人类对病毒的体液反应（Bajema 等人 2020），从而能够应用在恢复期血浆疗法的开发（Chen 等人 2020），或者用于研究疫苗接种后不同时间点的整体抗体反应（Anand et al. 2021a)，从而了解疫苗反应持久性。

Anand 等人在2021年提出了一种新型流式细胞术方法（Anand SP, et al. High-throughput detection of antibodies targeting the SARS-CoV-2 Spike in longitudinal convalescent plasma samples. Transfusion. 2021;61:1377–1382. doi: 10.1111/trf.16318.），就是使用由稳定表达的天然全长 SARS-CoV-2 S 蛋白的293 T 细胞检测血清中的抗体，这种方法规避了使用 RBD 肽进行血清抗体检测的限制。Simard C等人在最新一期的Cytotechnology提出了一个简化和标准化的方案，实现了半定量检测。

简而言之，将待测血浆与「以天然形式表达SARS-COV2 Spike蛋白的293T细胞（293T-SARS-CoV-2细胞系）」混合，存在于血浆中的抗体（如果有的话）就会结合293T-SARS-CoV-2细胞表面结合的S蛋白，然后再用抗人IgM-IgG-IgA的荧光抗体来检测该复合物的存在。 未转染的239T细胞用作阴性对照。

结果也是相当不错，通过比较非 COVID-19 和确诊的 COVID-19 样本，确定了阳性阈值为1.1，以此cut-off值确认了流式细胞术检测的敏感性 (97.7%) 和特异性 (100%)。


总体看下来，与现有的新冠抗体检测方法相比，该方法在时间上可能不具备优势，但是特异度和灵敏度上，由于采用了夹心的原理，所以会更有优势。



信源：Simard C, Richard J, Bazin R, Finzi A, Trépanier P. Standardization of a flow cytometry SARS-CoV-2 serologic test [published online ahead of print, 2022 Jan 3]. Cytotechnology. 2022;1-5. doi:10.1007/s10616-021-00511-1