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[凋亡检测] NAC对细胞的保护作用

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发表于 2011-6-20 09:12:14 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
我的样品能使细胞发生调亡,之后想检测一下调亡是不是与体内的ROS过量生成有关,所以打算先用加入NAC (N-acetyl-cysteine, ROS scavengere)检测一下是否NAC可以抑制我药物的细胞毒性以及细胞调亡率。我看文献当中用NAC处理细胞有两种,一种是先用NAC处理,再用药物处理。另一种是同时加入。我的是HeLa细胞,这个顺序有什么关系吗?哪种更好?

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发表于 2011-6-20 13:00:55 | 显示全部楼层

从原理上理解,应该是先加NAC,再加药物。
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 楼主| 发表于 2011-6-20 14:25:34 | 显示全部楼层
回复 niwanmao 的帖子

为什么呢?我觉得应该一起加呢,药物引发的ROS被NAC捕捉了,因此保护了细胞。
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 楼主| 发表于 2011-6-20 15:53:49 | 显示全部楼层
回复 niwanmao 的帖子

还有这个pretreatment with NAC是不是就是先加含有一定浓度NAC的培养基,先处理比如说4个小时(这个地方有的用4小时,有的用1小时,这个有什么区别吗),然后吸出培养基,换上含有药物的培养基再继续作用特定时间然后测。
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发表于 2011-6-20 16:47:21 | 显示全部楼层
maple032023 发表于 2011-6-20 14:25
回复 niwanmao 的帖子

为什么呢?我觉得应该一起加呢,药物引发的ROS被NAC捕捉了,因此保护了细胞。 ...

前面的回复因为停电,丢失了,现在重新打。
去年有个站友也问过这类问题,那时候我还不了解NAC这个东西。查过文献之后,发现国内的这篇文献提到一起加:http://www.flowcyto.cn/bbs/forum ... =1167&fromuid=1
而国外几篇都是先加NAC进行孵育,然后再和药物一起作用:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/ ... ?tool=pubmed#__sec6
http://www.pnas.org/content/93/21/11848.full.pdf+html
我还是认为国外文献可靠一点,因为NAC的作用机制就是促进GSH的产生来抑制ROS。:)
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 楼主| 发表于 2011-6-22 09:53:53 | 显示全部楼层
回复 niwanmao 的帖子

还有个问题想请教一下.这个NAC不是特别稳定,特别容易被氧综合掉.所以试剂开封后只能在冷藏密封避光保存一年.因为wako上面写着solubility in water,所以我就用水溶解,制成终浓度为1M的储备液.对于储备液的保存我也是4度冷藏密封避光保存,避免经常打开,这样保存可以吗?大概能保存多久呢?我问了wako公司的engineer,他们说对于储备液的保存没有做过相关稳定性试验.
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发表于 2011-6-22 11:16:50 | 显示全部楼层
maple032023 发表于 2011-6-22 09:53
回复 niwanmao 的帖子

还有个问题想请教一下.这个NAC不是特别稳定,特别容易被氧综合掉.所以试剂开封后只能 ...

在小日本的一个网站上,看到一套ROS检测试剂盒的说明书,该试剂盒包含了NAC,里面提到:
All reagents are shipped on dry ice.  Upon receipt, the kit should be stored at -20°C, or -80°C for long term storage.  When stored properly, these reagents are stable for at least twelve months.  Avoid repeated freezing and thawing.

http://www.funakoshi.co.jp/data/datasheet/EZN/ENZ-51010.pdf

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 楼主| 发表于 2011-6-22 12:07:58 | 显示全部楼层
回复 niwanmao 的帖子

恩,这个好,那我也把配好的储备液放-20度里.非常感谢.
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发表于 2011-8-26 10:19:05 | 显示全部楼层
此贴可做很多参考,good
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