NAC对细胞的保护作用

maple032023

我的样品能使细胞发生调亡,之后想检测一下调亡是不是与体内的ROS过量生成有关,所以打算先用加入NAC (N-acetyl-cysteine, ROS scavengere)检测一下是否NAC可以抑制我药物的细胞毒性以及细胞调亡率。我看文献当中用NAC处理细胞有两种，一种是先用NAC处理，再用药物处理。另一种是同时加入。我的是HeLa细胞，这个顺序有什么关系吗？哪种更好？

niwanmao

maple032023 发表于 2011-6-20 09:12

                               
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我的样品能使细胞发生调亡,之后想检测一下调亡是不是与体内的ROS过量生成有关,所以打算先用加入NAC (N-acet ...

从原理上理解，应该是先加NAC，再加药物。

maple032023

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为什么呢？我觉得应该一起加呢，药物引发的ROS被NAC捕捉了，因此保护了细胞。

maple032023

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还有这个pretreatment with NAC是不是就是先加含有一定浓度NAC的培养基，先处理比如说4个小时（这个地方有的用4小时，有的用1小时，这个有什么区别吗），然后吸出培养基，换上含有药物的培养基再继续作用特定时间然后测。

niwanmao

maple032023 发表于 2011-6-20 14:25

                               
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为什么呢？我觉得应该一起加呢，药物引发的ROS被NAC捕捉了，因此保护了细胞。 ...

前面的回复因为停电，丢失了，现在重新打。
去年有个站友也问过这类问题，那时候我还不了解NAC这个东西。查过文献之后，发现国内的这篇文献提到一起加：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum ... =1167&fromuid=1
而国外几篇都是先加NAC进行孵育，然后再和药物一起作用：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/ ... ?tool=pubmed#__sec6
http://www.pnas.org/content/93/21/11848.full.pdf+html
我还是认为国外文献可靠一点，因为NAC的作用机制就是促进GSH的产生来抑制ROS。：）

maple032023

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还有个问题想请教一下.这个NAC不是特别稳定,特别容易被氧综合掉.所以试剂开封后只能在冷藏密封避光保存一年.因为wako上面写着solubility in water,所以我就用水溶解,制成终浓度为1M的储备液.对于储备液的保存我也是4度冷藏密封避光保存,避免经常打开,这样保存可以吗?大概能保存多久呢?我问了wako公司的engineer,他们说对于储备液的保存没有做过相关稳定性试验.

niwanmao

maple032023 发表于 2011-6-22 09:53

                               
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还有个问题想请教一下.这个NAC不是特别稳定,特别容易被氧综合掉.所以试剂开封后只能 ...

在小日本的一个网站上，看到一套ROS检测试剂盒的说明书，该试剂盒包含了NAC，里面提到：
All reagents are shipped on dry ice.  Upon receipt, the kit should be stored at -20°C, or -80°C for long term storage.  When stored properly, these reagents are stable for at least twelve months.  Avoid repeated freezing and thawing.

http://www.funakoshi.co.jp/data/datasheet/EZN/ENZ-51010.pdf

maple032023

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恩,这个好,那我也把配好的储备液放-20度里.非常感谢.

zdx0

此贴可做很多参考，good