modfit分析细胞周期

黄豆豆

各位大神好，被巨核细胞倍体困扰很久了，在论坛老师的帮助下纠错把PI的电压更换成了PE通道，我是用CD41-APC标记的巨核细胞，今天又重新做了一次，在Modifit上分析后感觉还是不对，是我的细胞收集的太少的原因吗，所以分析不出来倍体（培养的原代细胞。。每次只能取一点点）。我这次把AHW都选了，不过PI的A还是log，不是线性的，我用了W和H。还有老师说的粘连体我也没看到。原始文件和我分析的图附在下面了，求各位大神指导，每次原代细胞太来之不易了。。。老不成功对于流式新手来说太艰难了。

niwanmao

上次那个帖子你删了吗？上次的数据前两天粗看了下，后来忘记回复了。
那个数据上PI线性模式能看到倍体关系，但是由于缺少倍体参照物，所以无法确定是不是存在多倍体。
下次如果要做，可买点鸡红细胞或鳟鱼红细胞作为倍体参照物，然后确定巨核细胞的倍体组成。

Merci

用FSC-A/FSC-H 散点图可以排除黏连体

黄豆豆

niwanmao 发表于 2022-1-19 13:43
上次那个帖子你删了吗？上次的数据前两天粗看了下，后来忘记回复了。
那个数据上PI线性模式能看到倍体关系 ...

倪老师晚上好，那个帖子是在别人帖子里的留言，我没删。好的，我尝试下，这次的数据您有空的时候能帮我看看吗？感谢

黄豆豆

Merci 发表于 2022-1-19 09:37
用FSC-A/FSC-H 散点图可以排除黏连体

巨核细胞应该是大一点的，我感觉应该在红的那一群里..这样去，会不会把目的细胞也去掉了。。

niwanmao

你这里设门图，将PI-A和PI-H改为线性显示，就能进行拟合了。

黄豆豆

niwanmao 发表于 2022-1-19 20:34
你这里设门图，将PI-A和PI-H改为线性显示，就能进行拟合了。

谢谢倪老师。还是不行，我在BD的机器上PE通道参数那   就不能选中那个log吧？都被压在线外了。。

niwanmao

黄豆豆 发表于 2022-1-20 00:24
谢谢倪老师。还是不行，我在BD的机器上PE通道参数那   就不能选中那个log吧？都被压在线外了。。
...

不应该啊，选择FSC大、CD41a和CD42b阳性细胞之后，线性呈现PI-A，应该是如下图的直方图分布。我现在暂时没Modfit，只能用R语言帮你绘制出分布情况，无法帮你拟合，但从图形分布上，很明显存在多个峰。

黄豆豆

niwanmao 发表于 2022-1-20 09:03
不应该啊，选择FSC大、CD41a和CD42b阳性细胞之后，线性呈现PI-A，应该是如下图的直方图分布。我现在暂时没 ...

谢谢倪老师，是不是我可以不用modfit软件，我自己找一个比如鸡血红细胞做为倍体参照，然后根据峰依次4N/8N这样的？ 那个软件怎么试都不行

niwanmao

黄豆豆 发表于 2022-1-20 17:43
谢谢倪老师，是不是我可以不用modfit软件，我自己找一个比如鸡血红细胞做为倍体参照，然后根据峰依次4N/8 ...

可以不用的，因为以前没有modfit软件之前，都是在cellquest等软件上直接设门看比例的。modfit主要是根据曲线分布，进行拟合，然后算出相对比较客观的比例而已。