tdTomato应该选用哪个通道

steven

大家好，有一个问题希望大家帮助解决。
过几天要做流式分选，是tdTomato+的细胞，但是现在配备的Aria3没有561nm的激光器，只有375/405，488，633nm三种激光器。
所以在现有的条件下，选哪个通道最适合呢，我查了一下好像PE最合适。
谢谢大家。

niwanmao

554激发，581发射。
最佳是561黄光。
Aria III这三个激光器，488nm只能激发非常少，效率大约10％，可能会比较尴尬。检测通道是和PE重叠的。

steven

niwanmao 发表于 2022-2-3 13:48
554激发，581发射。
最佳是561黄光。
Aria III这三个激光器，488nm只能激发非常少，效率大约10％，可能会比 ...

谢谢倪老师，只能先试试看了

steven

后来又查了查资料，确实488nm效率低的惊人，5%左右，资料里的配图和561nm相比，488nm几乎就没有阳性的细胞。而且我这次tdTomato阳性细胞比例也很低，用488nm可以预料啥都分不到。后来借了别的学院的sony机器，搭载了561nm激光，救我一命

tiger

steven 发表于 2022-3-17 08:34
后来又查了查资料，确实488nm效率低的惊人，5%左右，资料里的配图和561nm相比，488nm几乎就没有阳性的细胞 ...

正如你所说，tdTomato的最适激发光是554，最大激发光是581。用561检测，与PE同一通道。

steven

tiger 发表于 2022-3-17 09:07
正如你所说，tdTomato的最适激发光是554，最大激发光是581。用561检测，与PE同一通道。  ...

感谢回复。

小白兔

就PE就行，我前两天刚做完这个荧光鼠细胞分选，阳性和阴性分得很开，分选阳性率很高90%以上。我Aria 2

steven

小白兔 发表于 2022-3-30 22:21
就PE就行，我前两天刚做完这个荧光鼠细胞分选，阳性和阴性分得很开，分选阳性率很高90%以上。我Aria 2
...

你分选之后的阳性细胞用别的方法，比如说荧光显微镜再次确认了吗，确实都是tdTomato阳性的细胞吗。我后来用PE通道也试了一下（不是为了分选tdTomato+细胞，做别的实验顺便看一下PE的情况），确实也出现了分界清晰的峰，但是看比例的话远远超出实际tdTomato+可能的比例，所以我也不确定PE+是不是就是tdTomato+细胞。

小白兔

steven 发表于 2022-4-6 09:37
你分选之后的阳性细胞用别的方法，比如说荧光显微镜再次确认了吗，确实都是tdTomato阳性的细胞吗。我后来 ...

我分选完，把分选出来细胞重新上流式再看下阳性，能有至少90%以上

steven

小白兔 发表于 2022-4-24 08:48
我分选完，把分选出来细胞重新上流式再看下阳性，能有至少90%以上

你把分选的细胞重新上流式，用的还是PE通道吗，还是tdTomato的通道啊？如果还是PE通道的话，说明不了什么问题吧，用PE通道分选的，还用PE通道测试，只能说明分选的效率90%，不代表这些细胞都是tdTomato+吧。要是tdTomato通道90%阳性的话，那说明确实可以用PE通道替代分选。