PBMC分选刺激实验，细胞数太少，求指导

banana_lina

PBMC分选刺激实验，细胞数太少     我在预实验中的结果是：用冻存的不同病人的PBMC复苏后混合培养，复苏后PI染色计数活细胞为7.8X106个细胞，混合培养过夜后第二天PI染色计数，细胞数降低为3.1X106，细胞数损失太大，没有进行后续的分选。
     然后取病人的新鲜血液15ml分离PBMC后进行分选，分离PBMC后计数为1.8X107,磁珠阴选分选CD4+T细胞，分选后计数为2.0X106,因为后续实验还要继续用CD3/CD28刺激培养并分时取点，所以细胞数也还是太少。请各位老师指导问后续是怎样解决?还有不同病人PBMC混合培养后细胞数大量下降的原因是什么？

niwanmao

就像之前那位要做小鼠实验的站友帖子中讨论的那样，不同患者的PBMC混合后，容易发生相互之间的免疫排斥，导致细胞死亡。
所以不建议混合培养。

建议不同患者的PBMC分开培养、刺激，然后固定、破膜、染色可以混在一起做。

banana_lina

谢谢倪老师