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[凋亡检测] 请问这个图是什么参数没有调好

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发表于 2011-7-1 13:08:09 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
这是检测细胞凋亡的图,annexin-V单染的。我觉得FSC和SSC的都没调好,上机时凋了很久,还是这个奇怪的细胞团。请问是细胞没处理好还是我没调好参数。谢谢

未命名.JPG
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发表于 2011-7-1 13:33:42 | 显示全部楼层

图怎么这么小?
从FSC-SSC图上看,这些细胞就不对,似乎都是碎片。
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 楼主| 发表于 2011-7-1 13:41:39 | 显示全部楼层
第一次发图,应该是没调好大小,不好意思。那是细胞没处理好吗?因为是别人准备的细胞,那我再问问是怎样处理的吧。谢谢倪老师
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发表于 2011-7-1 13:44:24 | 显示全部楼层
accord220cs 发表于 2011-7-1 13:41
第一次发图,应该是没调好大小,不好意思。那是细胞没处理好吗?因为是别人准备的细胞,那我再问问是怎样处 ...

首先你问他,是不是贴壁细胞,如果是贴壁细胞,建议他还是不要做AV了。
如果是悬浮细胞,建议他染色前先在显微镜下面观察一下细胞形态好不好,如果不好,就不要做,省的浪费试剂。

如果是细胞状态好,而做成这样,肯定就是处理过程中试剂或操作力度的问题。
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 楼主| 发表于 2011-7-1 15:41:15 | 显示全部楼层
刚刚问了,一是细胞为贴壁细胞,胰酶中含有EDTA,二是确实细胞有些长过了。另外,PI染了15分钟,又等了2个小时才上的机,这样时间肯定过了。
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发表于 2011-7-1 16:16:57 | 显示全部楼层
accord220cs 发表于 2011-7-1 15:41
刚刚问了,一是细胞为贴壁细胞,胰酶中含有EDTA,二是确实细胞有些长过了。另外,PI染了15分钟,又等了2个小 ...

贴壁细胞建议他不要做AV-PI,很难做,建议他直接做细胞周期,检测亚G1峰。
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 楼主| 发表于 2011-7-1 16:29:16 | 显示全部楼层
好的,谢谢老师
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发表于 2011-7-2 08:23:10 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2011-7-1 13:33
图怎么这么小?
从FSC-SSC图上看,这些细胞就不对,似乎都是碎片。

是这样啊。我有一次帮别人做间充质干细胞的时候FSC-SSC散点图就是那样的,没有特别明显的细胞群。FSC调到10,也没有看见分群。他说他的细胞状态是很好的,因为我做的不多,所以不大肯定是不是他操作的问题。放了一晚上让其他人做,也只圈到了很小的一团细胞,FSC调到0,细胞还在最右边,而且明显还有部分在坐标外。
因为是别人的图,没有拿到,不能贴上来了。
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发表于 2011-7-2 10:26:20 | 显示全部楼层
chujindong 发表于 2011-7-2 08:23
是这样啊。我有一次帮别人做间充质干细胞的时候FSC-SSC散点图就是那样的,没有特别明显的细胞群。FSC调到 ...

看是不是碎片,FSC-SSC不是绝对的依据,还需要看荧光是不是在对角线附近。

如果FSC调到0信号还在最右边,那么那些信号肯定就有问题,不会是真正的细胞,应该放弃。
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发表于 2011-7-5 09:27:43 | 显示全部楼层
FSC和SSC位置跟放大倍数也有关系
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