老板让我做免疫磁珠来分选小鼠的脾脏中的B细胞，现在有....

李舜生

大佬求教!
老板分给我课题需要用到磁珠分选，分离小鼠脾脏B细胞，要从磁珠的合成开始做起，我之前一点也没有接触过相关知识，现在有几个问题解决不了
一个是分离脾脏B细胞所用到的磁珠一般是直径多少的MNPs。二是分离所需要的抗体买哪种的，我查了文献说是用cd19抗体，但是看了下都特别的贵，分选好像用的剂量也很大，不知道国内有没有公司卖便宜的大剂量的。三是流式检测需要的直标一抗多吗，我买了一管50ug（0.2mg/ml）偶联了PE的cd19抗体，不知道能用几次。实验室里只有我做这些，谁也没得问，现在像无头苍蝇，对了我之后还要用CFSE法做细胞增殖，还是一头雾水，找的protocol不知道对不对

niwanmao

为啥不能用现成的商品化磁珠分选试剂呢？

tianshiyu

同学我也跟你一头雾水，也是要取人组织里的B细胞

tianshiyu

niwanmao 发表于 2022-3-24 10:10
为啥不能用现成的商品化磁珠分选试剂呢？

管理员老师，请问流式分选人组织里的B细胞， 我用CD45、CD3、CD19三个抗体可以分选出纯度较高的B细胞吗？还需要加入其他抗体吗？

niwanmao

tianshiyu 发表于 2022-3-24 13:54
管理员老师，请问流式分选人组织里的B细胞， 我用CD45、CD3、CD19三个抗体可以分选出纯度较高的B细胞吗？ ...

可以的，只是会有一些浆细胞。如果要把浆细胞去除，最好加上CD138排除掉阳性的浆细胞。

李舜生

niwanmao 发表于 2022-3-24 10:10
为啥不能用现成的商品化磁珠分选试剂呢？

我查看了一下相关的商品价格都比较昂贵，老板不想花这个钱

hannotech

可以用SPIO，或是微米级的磁珠。如何选，看你后续是做什么。可以直接标记上一抗来选；也可先用一抗与细胞结合，再用二抗/proteinAG磁珠来选。

李舜生

niwanmao 发表于 2022-3-24 10:10
为啥不能用现成的商品化磁珠分选试剂呢？

现在最大的问题还是抗体的问题，分选用量挺大的，但是我在不少卖抗体的公司官网看发现都量少且贵，不知道这个一般是买哪个公司的产品，老师

李舜生

hannotech 发表于 2022-3-25 09:59
可以用SPIO，或是微米级的磁珠。如何选，看你后续是做什么。可以直接标记上一抗来选；也可先用一抗与细胞结 ...

后续我是要用试剂刺激，培养三天，然后测一些指标。现在想法是直接给磁珠标记上一抗来选，但是这样cd19抗体用量好像挺大的，我找到的这个抗体产品就基本都是100ug5k左右，吃不消，不知道大佬你做的时候怎么解决这个问题的

niwanmao

李舜生 发表于 2022-3-25 09:58
我查看了一下相关的商品价格都比较昂贵，老板不想花这个钱

相信我，如果不买商品化的产品，自己摸索花的钱会更多。