关于脾脏中T细胞CD44 CD62L分群的疑问

wangyufei517

各位老师好，我做小鼠脾脏T细胞CD44 CD62L分群的时候总是会出现双阴性的细胞群（第一张图是CD4和CD8分群，第二、三张图是CD44 CD62分群）。我导说这是死细胞，说我技术不过关。我每一步都尽量做得很好了，但还是出现大量双阴性的。希望老师们能解答一下。
难道是裂红时间久了？我是2mL ACK混匀后裂解1分半，用PBS中止，离心。

niwanmao

你指的是CD4和CD8上面的双阴性群体吗？

wangyufei517

niwanmao 发表于 2022-3-24 14:54
你指的是CD4和CD8上面的双阴性群体吗？

是图4和5 CD44 CD62L的左下的那群细胞

niwanmao

wangyufei517 发表于 2022-3-24 15:13
是图4和5 CD44 CD62L的左下的那群细胞

这种双阴性的细胞，有文献报道跟肿瘤、衰老都有关。从你前一个门看，应该是圈准了，所以是否跟小鼠本身有关。

wangyufei517

niwanmao 发表于 2022-3-24 16:02
这种双阴性的细胞，有文献报道跟肿瘤、衰老都有关。从你前一个门看，应该是圈准了，所以是否跟小鼠本身有 ...

我这个样本确实是荷瘤小鼠的脾脏做的，我再查查相关文献，感谢！

Climber

一方面原因正如倪老师所说与肿瘤衰老有关，另一方面从技术上来讲这群DN细胞是由CD62L单阳细胞降解而来，因为CD62L对温度敏感，所以小鼠脾脏取出后用冷的2% RPMI泡着放在冰上，之后进行冰上研磨，至于脾脏裂红，我们做过小鼠脾脏裂红与不裂的对比 没有太大差异

ccx793244586

wangyufei517 发表于 2022-3-25 10:00
我这个样本确实是荷瘤小鼠的脾脏做的，我再查查相关文献，感谢！

这种小鼠CD44lowCD62L-T细胞属于terminally difffferentiated effffector T cells (TEMRA），在肿瘤模型中比例升高也是正常的吧

wangyufei517

Climber 发表于 2022-4-15 11:17
一方面原因正如倪老师所说与肿瘤衰老有关，另一方面从技术上来讲这群DN细胞是由CD62L单阳细胞降解而来，因 ...

好的！我下回在冰上研磨试试，这回是研磨完一直放在孔板里，等所有的脾都研磨后统一转到离心管离心的，有可能是您说的问题

wangyufei517

ccx793244586 发表于 2022-4-16 16:26
这种小鼠CD44lowCD62L-T细胞属于terminally difffferentiated effffector T cells (TEMRA），在肿瘤模型 ...

我最近一直没有做过正常模型的小鼠脾脏，全是肿瘤的，所以不知道是不是只在肿瘤中出现了这种情况，下次做个正常的小鼠作对照看看

半年y

这个就属于批间差异我觉得，因为我也是经常做出来左下角有一团细胞，有时候又没有，还都是正常小鼠，可能跟操作细节有关，理想情况应该是左下角很少或没有