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[淋巴细胞相关] Treg的圈门问题

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发表于 2022-3-28 11:35:31 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
本帖最后由 Weld 于 2022-3-28 11:34 编辑

各位大佬,本人进行CD4+磁珠分选Balb/c小鼠脾脏细胞后体外诱导Treg分化,用CD25-PE和Foxp3-BV421鉴定时遇到问题,烦请指点一下。
Foxp3单染虽然分群明显,但是和CD25一起画十字门后效果不佳,十字门的位置也无法移动。
请问:
①是否是染色或者上机时的问题导致细胞群未分开?上机时调整过BV421电压,但是细胞群还是靠得很近,无法分开。
②如果染色和上机没有问题,是否还有其他圈门方法获得CD25+FOXP3+门。是否能直接通过FOXP3+鉴定Treg细胞。

Control.png
BV421 单染 十字门.jpg
BV421 PE双染 十字门.png

BV421-Foxp3和PE-CD25双染

BV421-Foxp3和PE-CD25双染
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发表于 2022-3-28 12:27:03 | 显示全部楼层
你补偿没调好。另外T细胞在体外刺激活化后表达CD25的水平会升高,此时不适合再用CD25+Fxop3圈门,应该只用CD4+Foxp3+
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 楼主| 发表于 2022-3-28 12:45:10 | 显示全部楼层
scaleus 发表于 2022-3-28 12:27
你补偿没调好。另外T细胞在体外刺激活化后表达CD25的水平会升高,此时不适合再用CD25+Fxop3圈门,应该只用C ...

您好,我的两个染料发射光谱基本上无重叠,也需要调补偿吗?另外多谢关于圈门的指点。
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发表于 2022-3-29 16:16:36 | 显示全部楼层
Weld 发表于 2022-3-28 12:45
您好,我的两个染料发射光谱基本上无重叠,也需要调补偿吗?另外多谢关于圈门的指点。 ...

看你图上是有的
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