请教流式分析6孔板中活细胞率问题

maiyayilisa

请教老师们学长们，我用流式分析6孔板中一个孔的细胞活率，用7-AAD染色后，请问应该怎么设门呢？我如果设活细胞门（图1），那么活率检测出来7-AAD阴性细胞群接近100%（图2），显然6孔板中活率不至于这么高；如果对全部细胞设门（图3），那7-AAD阴性又变成了76%（图4），由于各种颗粒碎片也算在内，这个76%应该是不准的。请问怎样设门才能代表活细胞率？

maiyayilisa

弄错了纠正一下，图4是90%

scaleus

可以通过7-AAD x FSC排除碎片

niwanmao

看不出你用哪个通道获取的信号，但看图形感觉7-AAD是不是没染上？或者是通道获取错误？

maiyayilisa

niwanmao 发表于 2022-3-29 19:51
看不出你用哪个通道获取的信号，但看图形感觉7-AAD是不是没染上？或者是通道获取错误？ ...

谢谢老师，抱歉看到的晚了，图是这样的，图1中圈出状态好的细胞,占12.2%，这群细胞点击进入图2，图2中percp是7-AAD，可见图2活细胞占98.4%。想请教一下我上机流式管中的细胞活率应该怎么算呢，感觉写98.4%是不是不对呀，谢谢老师！

maiyayilisa

scaleus 发表于 2022-3-29 16:17
可以通过7-AAD x FSC排除碎片

谢谢老师，请教一下7-AAD×FSC方法是什么呀，这个复杂吗

niwanmao

maiyayilisa 发表于 2022-4-5 13:07
谢谢老师，抱歉看到的晚了，图是这样的，图1中圈出状态好的细胞,占12.2%，这群细胞点击进入图2，图2中per ...

你这是什么细胞？左侧那群FSC小的，7-AAD如何？

另外，你的7-AAD是如何染的？

maiyayilisa

niwanmao 发表于 2022-4-5 14:22
你这是什么细胞？左侧那群FSC小的，7-AAD如何？

另外，你的7-AAD是如何染的？ ...

老师好，这是T细胞，没养好活力不好。图4是图3中左边那群细胞的，显示也有7-AAD阴性的细胞群，但不知道是不是细胞碎片染不上7-AAD。7-AAD是按照1E6个细胞加5ul的比例加进去，反应体积大约200ul，加进去十几分钟后上机，谢谢老师！

niwanmao

maiyayilisa 发表于 2022-4-6 10:11
老师好，这是T细胞，没养好活力不好。图4是图3中左边那群细胞的，显示也有7-AAD阴性的细胞群，但不知道 ...

左边这些从形态上来说，应该是凋亡细胞，但7-AAD如此之少，感觉应该还是没染上的可能性最大。

maiyayilisa

好的，谢谢老师！请问右边的群如果7-AAD染够了的话，那活率就按右边的群算吗，与凋亡细胞无关吧