血液染色之后应该先裂红还是应该先染7AAD

叶晶

最近做血液染色，先染表面标记物之后再裂红，上机前加了7AAD染色，发现活率很低（见下图），但是显微镜下可能活率至少40%，所以想请教一下是因为裂红导致有7AAD的假阳性吗？还有关于检测细胞内marker 的时候，是不是不能用染核酸的形式来表征活死。

                               
登录/注册后可看大图

niwanmao

你用的红细胞裂解液，是否含多聚甲醛？

如果是用普通的氯化铵裂解液，一般不会影响。

liuruiluna

细胞内maker，已经固定破膜了，那肯定不能用核酸染料7AAD，就是会全都染上。，应该用live/dead， Fixable viability dye 这样的胺基反应染料。红细胞裂解液用的是哪种，会不会是用了一步连裂解带固定的裂解液？如果是，那也不能用7AAD 和PI 这样的死活染料

叶晶

niwanmao 发表于 2022-3-31 07:20
你用的红细胞裂解液，是否含多聚甲醛？

如果是用普通的氯化铵裂解液，一般不会影响。 ...

老师您好，我用的是BD的Lysing Solution 10X Concentrate，货号是349202，应该是没有多聚甲醛的

叶晶

liuruiluna 发表于 2022-4-1 14:57
细胞内maker，已经固定破膜了，那肯定不能用核酸染料7AAD，就是会全都染上。，应该用live/dead， Fixable v ...

好的，谢谢解答，我用的是BD的Lysing Solution 10X Concentrate，货号是349202

niwanmao

叶晶 发表于 2022-4-7 12:55
老师您好，我用的是BD的Lysing Solution 10X Concentrate，货号是349202，应该是没有多聚甲醛的
...

BD官网的说明书上面显示，这个裂解液是含多聚甲醛的，所以不能用于7-AAD染死活的实验。


要么换裂解液，要么换死活染料。

Climber

是的  倪老师说得对 BD的裂解液是含有多聚甲醛的，相比于氯化铵裂解稍微会干净点 FSC/SSC细胞分群也会明显一些

叶晶

niwanmao 发表于 2022-4-7 18:32
BD官网的说明书上面显示，这个裂解液是含多聚甲醛的，所以不能用于7-AAD染死活的实验。

老师，含有多聚甲醛的裂解液不能用7AAD染色，是因为多聚甲醛在固定的时候会破膜吗？如果换裂解液的话，老师有什么推荐吗？如果换活死染料的话是换成zombie dye系列的吗

叶晶

Climber 发表于 2022-4-7 21:05
是的  倪老师说得对 BD的裂解液是含有多聚甲醛的，相比于氯化铵裂解稍微会干净点 FSC/SSC细胞分群也会明显 ...

好的，谢谢，因为我之前只用过这个裂解液，想问一下一般的氯化铵裂解液效果还可以吗？这个是不是可以自己配？

niwanmao

叶晶 发表于 2022-4-17 16:56
老师，含有多聚甲醛的裂解液不能用7AAD染色，是因为多聚甲醛在固定的时候会破膜吗？如果换裂解液的话，老 ...

多聚甲醛不会破膜，但是固定过的细胞，膜的通透性会增高，所以死活染料容易进入。

两个方案：
1、换死活染料，换成适用于固定样本的死活染料，无论是live/dead还是zombie，都有专门的针对固定样本的型号。
2、换裂解液，我认为这个成本最低，氯化铵裂解液配方，站内有。