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[淋巴细胞相关] 请问肠系膜淋巴结和脾脏染巨噬细胞CD206需要破膜吗?

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发表于 2022-4-1 16:03:56 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
想请教各位老师,肠系膜淋巴结和脾脏的M2型巨噬细胞染CD206的话需要破膜嘛?我在结肠上的巨噬细胞CD206是能染上的,但是淋巴结和脾脏的巨噬细胞CD206死活染不上,请问是什么原因呢?

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发表于 2022-4-1 16:20:59 | 显示全部楼层
CD206是跨膜表达,如果已经测试出表染不好,可以破膜染,我猜想,结肠的巨噬细胞是用酶消化过的,表位可能在消化过程中已经被暴露了一些,换句话说,酶在消化的时候可能已经对膜有一定的破的作用, 淋巴结和脾脏细胞只是简单处理就可以得到, 抗原表位就暴露的少,所以染不上

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 楼主| 发表于 2022-4-1 21:56:39 | 显示全部楼层
liuruiluna 发表于 2022-4-1 16:20
CD206是跨膜表达,如果已经测试出表染不好,可以破膜染,我猜想,结肠的巨噬细胞是用酶消化过的,表位可能 ...

那请问如果我同时做肠系膜淋巴结和脾脏和结肠的CD206,是不是就要平行破膜了?但是我的巨噬细胞是摄取了一些带荧光的颗粒的,如果它破膜了,那个带荧光的颗粒会不会就,没了。。。
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发表于 2022-4-2 09:55:48 | 显示全部楼层
本帖最后由 liuruiluna 于 2022-4-2 10:15 编辑
liushitainan 发表于 2022-4-1 21:56
那请问如果我同时做肠系膜淋巴结和脾脏和结肠的CD206,是不是就要平行破膜了?但是我的巨噬细胞是摄取了 ...

这个需要去测试,,因为那个荧光颗粒是什么情况也不太清楚,一般打孔的话打的还是比较细密的,巨噬细胞内吞的颗粒可能要大一些,需要去测试下;还有也可以试试不破膜只是表染的情况下提高CD206抗体的用量,试试看,不保证能有效。  另外我想起,从小鼠脾脏或者淋巴组织(我觉得包括淋巴结)直接提取含有巨噬细胞的细胞悬液也要酶消化,不像TBNK 直接碾碎了就行了   
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 楼主| 发表于 2022-4-2 16:57:36 | 显示全部楼层
liuruiluna 发表于 2022-4-2 09:55
这个需要去测试,,因为那个荧光颗粒是什么情况也不太清楚,一般打孔的话打的还是比较细密的,巨噬细胞内 ...

也需要酶消化吗?是和结肠一样的剪碎消化还是碾碎以后消化?有那篇文献嘛?
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发表于 2022-4-2 18:43:39 | 显示全部楼层
liushitainan 发表于 2022-4-2 16:57
也需要酶消化吗?是和结肠一样的剪碎消化还是碾碎以后消化?有那篇文献嘛? ...

首先,就是在美天旎、stemcell用于小鼠髓系细胞分选产品和资料中,都提及这点以及有相关产品整合在这个解决方案里,这个我之前用过。在流式检测样本制备的材料中也是这样。做TBNK 不用消化,髓系细胞需要。
另外你要文章,我就去查了一篇 可以看下。
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6364618/

Identification and isolation of splenic tissue-resident macrophage sub-populations by flow cytometry


Abstract
Tissue-resident macrophages in the spleen, including red pulp and white pulp macrophages, marginal zone macrophages (MZMs) and marginal zone metallophilic macrophages (MMMs), are highly heterogeneous as a consequence of adaptation to tissue-specific environments. Each macrophage sub-population in the spleen is usually identified based on the localization, morphology and membrane antigen expression by immunohistochemistry. However, their phenotypical and functional characteristics remain incompletely understood due to the difficulty of identification and isolation by flow cytometry. We used a cocktail of three enzymes (Collagenase D, Dispase I and DNase I), rather than traditional mechanical grinding, for isolation of each sub-population, which resulted in significant improvement of isolation of these macrophage sub-populations, particularly MZMs and MMMs, as determined by CD11bhiF4/80medTim4hi and CD11bhiF4/80medTim4med, respectively. This method should be helpful for molecular and functional characterization of each splenic resident macrophage sub-population.
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 楼主| 发表于 2022-4-6 17:36:48 | 显示全部楼层
liuruiluna 发表于 2022-4-2 18:43
首先,就是在美天旎、stemcell用于小鼠髓系细胞分选产品和资料中,都提及这点以及有相关产品整合在这个解 ...

好滴,谢谢老师
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