小鼠spleen，死活分不开，efluor 506染料

shiyisyl · 发表于 2022-4-18 15:26:47

本帖最后由 shiyisyl 于 2022-4-18 19:12 编辑

各位老师，请假大家个问题。为什么同一批细胞，同一块板子，为什么有的细胞死活能分开，有的就分不开呢？而且，为什么有的细胞拖尾这么严重呢？

Climber · 发表于 2022-4-18 18:44:48

你的图片无法显示，是因为你可能直接将图片拖入了编辑框，导致图片成为了BASE64编码，所以无法显示出来。以后请通过“高级模式”下的编辑框工具栏上的图片按钮，上传图片——转自倪老师的原话

shiyisyl · 发表于 2022-4-18 19:09:46

本帖最后由 shiyisyl 于 2022-4-19 09:18 编辑

已经修改

shiyisyl · 发表于 2022-4-18 21:20:14

Climber 发表于 2022-4-18 18:44
你的图片无法显示，是因为你可能直接将图片拖入了编辑框，导致图片成为了BASE64编码，所以无法显示出来。以 ...

已经修改，谢谢指点

Climber · 发表于 2022-4-23 11:19:29

个人认为，有错误请大家指正，死细胞和活细胞区分并不是像CD4 CD8这种，有就是有，没有就是没有的状态，而是死活细胞都有信号，只是信号的强弱问题。目前的死活细胞染料区分死活属于一种定量指标，也就是一种从低到高连续的信号存在，因为从活到死也是一种渐变的状态，所以更多的还是考虑细胞本身状态有关系吧。至于您说的拖尾现象，对于eflour506的死活染料来说很正常，因为死活细胞染料在506具有很强的荧光信号，所以在调补偿时与紫激光临近的其他通道比如450 421的补偿值应该很大 506被拉得很宽也很正常，如果这是没有调补偿那我也不知道啥原因了。

liuruiluna · 发表于 2022-4-25 13:14:50

还有死活染料亮度非常强，不知道你染色的体系是按什么，一般1ml加1ul去染，然后再洗1-2遍，会比较好，如果是按等比例缩小用量，比如有人用100ul加0.1ul去加，这个量很可能枪头带进去的就超过0.1 ，就容易出现染得量过量。所以如果体系要比较小的话，可以先将染料稀释了再加。再就是要用不带蛋白的PBS染色。
再就是像climber 战友说的，跟细胞状态有关系。1 和2 图细胞状态从FSC/SSC看就有些区别，图1的细胞群与碎片的交界就不太清楚

shiyisyl · 发表于 2022-5-2 14:05:52

liuruiluna 发表于 2022-4-25 13:14
还有死活染料亮度非常强，不知道你染色的体系是按什么，一般1ml加1ul去染，然后再洗1-2遍，会比较好，如果 ...

感谢指点

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