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[细胞因子检测] 胞内细胞因子检测问题

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发表于 2022-5-5 17:47:36 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
各位大佬好,我最近想检测IFNγ、TNFα和穿孔素的表达。
先讲下我的实验设计,我是在细胞系中敲掉了某个基因,然后用这个细胞进行皮下成瘤,最终取瘤后制备成单细胞悬液在染色上机。我的目的是为了看这个基因敲除后会不会影响IFNγ+/TNFα+CD8+T细胞的表达
问题:检测这些细胞因子需要进行刺激吗?之前不知道这个步骤,然后直接破膜进行了染色,发现表达量特别低。
刺激会不会将基因的影响给覆盖掉呀?
如果刺激的话我是要拿肿瘤组织制备的单细胞悬液进行培养后刺激吗?(当天肯定没法完成单细胞悬液制备到刺激再到上机的过程

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发表于 2022-5-5 19:49:47 | 显示全部楼层
按照你的说法,应该是需要从小鼠局部组织中解离出CD8+T细胞,然后检测其胞内IFNγ和TNFα的表达。解离成单细胞,然后进行PMA+离子霉素刺激,分析你所需要的特征。

这种刺激,反映的是细胞功能,所以跟你所需要看的基因影响无关。因为你肯定要设置空白对照(生理盐水)、阴性对照(未敲除基因)的。
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