treg流式检测中应用FMO设门的问题

archerliang

请教各位，为什么在应用了FMO之后cd4的阴性群群被切割了？具体情况请看图。请各位老师帮忙分析一下。
下面三幅图分别是：FITC的减一管，PerCP的减一管，样本管

FITC的减一管

PerCP的减一管

样本管

niwanmao

这说明，阴性群非特异性结合，对背景荧光的贡献无法忽略，因此FMO对照无法用于设门，需要做微调，就是向右移到分界处。

archerliang

niwanmao 发表于 2022-5-13 16:51
这说明，阴性群非特异性结合，对背景荧光的贡献无法忽略，因此FMO对照无法用于设门，需要做微调，就是向右 ...

谢谢老师，那用FC封闭之后再做FMO会好些吗？

niwanmao

archerliang 发表于 2022-5-16 15:38
谢谢老师，那用FC封闭之后再做FMO会好些吗？

可以试试。

archerliang

niwanmao 发表于 2022-5-16 20:09
可以试试。

老师，我们用了fc封闭后还会出现同样的问题，这是什么原因呢

niwanmao

archerliang 发表于 2022-9-20 14:22
老师，我们用了fc封闭后还会出现同样的问题，这是什么原因呢

抗体用量，可做一个梯度，看看是否低浓度可改善阴性群位置。

Yuck

archerliang 发表于 2022-9-20 14:22
老师，我们用了fc封闭后还会出现同样的问题，这是什么原因呢

说明对照用的不好，空白对照，生物学对照，同型对照，FMO对照需要对比验证来用，不能一味的用fmo撒

忞勣的FACS

为何不直接微调呢？FMO对照又不是一定准确的吧

archerliang

忞勣的FACS 发表于 2022-9-21 22:20
为何不直接微调呢？FMO对照又不是一定准确的吧

因为我在想会不会那群细胞介于阴性和弱阳性之间，所以才会出现这种情况

archerliang

Yuck 发表于 2022-9-20 15:51
说明对照用的不好，空白对照，生物学对照，同型对照，FMO对照需要对比验证来用，不能一味的用fmo撒 ...

空白做了，fmo能包含空白对照没问题，同型没做，但免疫细胞做了fc封闭理论上不需要同型对照了。