补偿调节和细胞圈门

17702348577

老师你好，这是我从仔鸡的肝脏提出的细胞，做的FITC/PI凋亡检测，细胞圈门见图1，图2分别是单染和双染调节补偿后的图，请问老师，这个补偿还需要更改吗？因为采用这个补偿调节，有几个样本图片很怪（图3）。麻烦老师解答！

niwanmao

17702348577 发表于 2022-6-21 18:01
找到上传办法了，麻烦倪老师帮忙看一下！

首先，按如下补偿调好：



其次，PI的通道建议用PerCP-cy5.5，分得会更好，最后D组的结果见下图，其它组按类似的方法分析：
D1-G&D2-G&D3-G&D4-G&D5-G.pdf (143.16 KB, 下载次数: 18)

2022-6-22 13:35 上传

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niwanmao

补偿值是多少？
看图3里面Annexin V FITC都没什么阳性。染色上面是否有问题？

17702348577

niwanmao 发表于 2022-6-9 14:40
补偿值是多少？
看图3里面Annexin V FITC都没什么阳性。染色上面是否有问题？ ...

老师您好，补偿值如图，FITC 16.3537/PI 0.2686。染色方面应该没有问题，是严格按照试剂盒上进行的，使用的试剂盒是美仑的。有一些样本的FITC是有阳性的，所以有考虑过是不是补偿调节的问题。

niwanmao

17702348577 发表于 2022-6-9 15:16
老师您好，补偿值如图，FITC 16.3537/PI 0.2686。染色方面应该没有问题，是严格按照试剂盒上进行的，使用 ...

这种阳性看着也不对劲。
双阴性区域没有，如果左上那部分算双阴，说明图形完全扭曲了。如果确实没有双阴性的活细胞，那么就说明细胞活力确实不行了。

是否在染色前看过细胞在显微镜下的形态？

17702348577

染色之前没有看过形态，只是大概数了一下细胞数量，请问老师，现在还有办法调整补救一下吗。

niwanmao

17702348577 发表于 2022-6-10 00:03
染色之前没有看过形态，只是大概数了一下细胞数量，请问老师，现在还有办法调整补救一下吗。 ...

目前不太好说，最好把FCS文件传上来看看。

17702348577

fsc文件没有找到上传链接

17702348577

niwanmao 发表于 2022-6-12 09:39
目前不太好说，最好把FCS文件传上来看看。

找到上传办法了，麻烦倪老师帮忙看一下！

17702348577

niwanmao 发表于 2022-6-22 13:36
首先，按如下补偿调好：

倪老师您好，按照您的补偿数值调节后，图片还是有点奇怪，请问是软件问题吗？（我用的是flowjo10.6.4）还是坐标轴没有调好呢？麻烦老师您了。