流式细胞仪测细菌应用上的问题——适用性，阈值。

LiuWenjuan

老师好，我有几个问题，如下，
1. 我用的流式细胞仪是CytoFlex S (Beckman 贝克曼公司）型号。样品是细菌，细菌的大小在2μm左右。贝克曼网站的仪器说明上写着“可检测的颗粒直径低至80 nm”。但管仪器的老师说，用这台仪器测细菌不合适，用纳米流式仪测更准确。鉴于院里还没有买纳米流式，如果用这台CytoFlex S将就着做，不知可行否？出的结果可信度有多高？

2. 我在用CytoFlex S流式细胞仪测细菌时，需要手动降低阈值，以便收集到我的细菌样本。请问老师如何确定合适的阈值呢？怎么看阈值太大或者太小了。

3. 最初我没有手动调阈值，是仪器自动设置的，主阈值设在FSC通道。在跑阴性对照细菌样本（未经任何荧光染色）时，运行了好几分钟，收集到的颗粒数只有一两百个。但是，如果我的细菌样本染过PI，收集颗粒数会显著变多，大概70秒有一万个了（仍然是仪器自动设置阈值）。请问为什么染色后就很好收集了呢？


先谢过老师了

niwanmao

可以做的，只是需要用紫光通道的SSC

LiuWenjuan

niwanmao 发表于 2022-6-28 14:15
可以做的，只是需要用紫光通道的SSC

好的。不好意思，请问老师我提的另外两个问题（2和3）该如何解决呢？

risah

1、CytoFlex 如果仪器配有405激光器就可以用Vssc测小颗粒物质。但如果是2μm左右的菌，用常规FSC/SSC也能分得很好。小于1μm的，建议用VSSC分析。
2、CytoFlex S流式细胞仪测小颗粒时，需要手动设阈值，阈值设1000-2000；自动阈值会切掉小颗粒。

LiuWenjuan

risah 发表于 2022-6-28 14:48
1、CytoFlex 如果仪器配有405激光器就可以用Vssc测小颗粒物质。但如果是2μm左右的菌，用常规FSC/SSC也能分 ...

感谢老师指教。我这就重做一遍，调整阈值看看。

Yuck

risah 发表于 2022-6-28 14:48
1、CytoFlex 如果仪器配有405激光器就可以用Vssc测小颗粒物质。但如果是2μm左右的菌，用常规FSC/SSC也能分 ...

Vssc在哪里，我都不知道有这个通道。是每台仪器都有吗，我去搜一搜。

wmj123456

niwanmao 发表于 2022-6-28 14:15
可以做的，只是需要用紫光通道的SSC

倪老师，有关VSSC，是指的横坐标选择一个紫光的通道，然后纵坐标选择SSC？它跟其他通道的荧光通道和SSC，有什么优势？VSSC有相关的科普资料吗？

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-5-6 22:57
倪老师，有关VSSC，是指的横坐标选择一个紫光的通道，然后纵坐标选择SSC？它跟其他通道的荧光通道和SSC， ...

Beckman仪器上用紫光激发检测的SSC，因为波长较短，所以更容易区分小颗粒。

wxd

常规流式可以检测大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的死活、活性氧等简单指标。
我单位用的就是普通的流式细胞仪。检测细菌时，将FSC/SSC调整成对数形式，调低阈值即可。
在不同型号的仪器上确定检测阈值，可以用生理盐水等没有杂质的溶液重悬正常培养的细菌，上机检测，调整阈值直到FSC/SSC坐标系中出现完整的细胞群。

btx362237729

niwanmao 发表于 2023-5-7 09:56
Beckman仪器上用紫光激发检测的SSC，因为波长较短，所以更容易区分小颗粒。 ...

BD的机器可以用紫光激发检测SSC吗？比如最常见的cantoII？