请教大家，胞内染色后的设门问题

Chemericcat

大家好，
我在对细胞系进行了固定-破膜-胞内染色后上机检测。
如下图所示，在SSC-FSC设门时，我圈定细胞应该按照左图还是右图？因为时细胞系，所以看到了两个群我有点疑惑，有没有大神可以帮忙解疑答惑一下？
谢谢！

图2

图1

niwanmao

根据你染色的标记，进行反设门，确认该类细胞在左侧群中是否存在。如果有，则全圈，如果没有，则按部分圈。

一般，建议全圈，因为特异性设门标记已可排除其它信号干扰。

Chemericcat

niwanmao 发表于 2022-7-19 01:24
根据你染色的标记，进行反设门，确认该类细胞在左侧群中是否存在。如果有，则全圈，如果没有，则按部分圈。 ...

谢谢倪老师。但还是好奇，出现这种情况的原因是什么？用该细胞系做表面染色的时候SSC-FSC就只有一个细胞群（排除debris和死细胞）。

liuruiluna

可能对样本进行刺激了吧，刺激之后样本中细胞的状态发生了区别，所以在FSC SSC 上展示出了形状上的变化，所以要通过死活染料进行一些排除

niwanmao

Chemericcat 发表于 2022-7-19 16:04
谢谢倪老师。但还是好奇，出现这种情况的原因是什么？用该细胞系做表面染色的时候SSC-FSC就只有一个细胞 ...

固定和破膜，本身就会改变FSC和SSC，造成分群形状改变。

Chemericcat

liuruiluna 发表于 2022-7-19 12:30
可能对样本进行刺激了吧，刺激之后样本中细胞的状态发生了区别，所以在FSC SSC 上展示出了形状上的变化，所 ...

感谢解答

Chemericcat

niwanmao 发表于 2022-7-19 13:08
固定和破膜，本身就会改变FSC和SSC，造成分群形状改变。

明白了，感谢！

liailin00

niwanmao 发表于 2022-7-19 08:24
根据你染色的标记，进行反设门，确认该类细胞在左侧群中是否存在。如果有，则全圈，如果没有，则按部分圈。 ...

请问怎么进行反设门？

Climber

liailin00 发表于 2022-8-11 23:07
请问怎么进行反设门？

可用先直接圈CD45+或者你的目的细胞群maker，然后看目标细胞群在FSC SSC的位置，从而判断有没有漏掉细胞