AML的多色MRD分析可重复性标准化模板

niwanmao

多参数流式细胞术 (MFC) 检测到的可测量残留病灶 (MRD) 与 AML 患者的不良预后相关。目前国内不少医院和检测机构，已开始使用多色流式方案检测MRD，但对于AML，大家的分析或多或少都存在一定的分析者差异，需要通过分化轨迹判断，有一定主观性，较难实现可重复分析。

2022年7月18日，Leukemia杂志上发表的这篇文章，使用了简单且广泛使用的8色方案，但其特色在于使用了固定门的层级设门策略，将基于 LAIP 的DfN策略集成在设门中，实现了良好的可重复性。

具体步骤如下，我在图上加了几个箭头以便说明，简单介绍一下，作者将原始区域+单核区域圈起来之后，接着圈选CD33+和/或CD13+区域，所以第2步是一个倒L型门，再接着分出CD34+和CD34-两群（第3步的红色和蓝色），接着将这两群分别呈现在CD117/HLA-DR散点图上，用十字门分出四个不同表达的区域，如此形成了2×4=8个群体，这8个群体，我们可以理解为8个不同表达性质的原始细胞，接着对这8个群体分别评估其CD33、CD13的表达强度是否有缺失，CD7和CD56是否有伴随表达（需强调的是，CD33、CD13的缺失需要真正的阴性，而非弱表达；CD7和CD56的伴随表达需要强表达才比较可靠），这两方面特征分别对应第5和第6个小图上面的红色和蓝色门，如此8个群体×4个异常特征，就形成了最终我们要分析的32个亚群，这32个亚群的门固定下来之后，利用正常骨髓、CR的ALL患者骨髓、原发中枢神经系统淋巴瘤患者骨髓等​建立正常参考值范围。

测量值和参考值之间的差值反映了AML负荷（占CD45+ 细胞的百分比）。 所有存在CD13 或 CD33 缺失、CD7 或 CD56 的跨系表达的细胞群，如果表型的异常存在一致性，那么就可以加起来作为 MRD 水平。



作者对诱导化疗后的246 名 AML 患者进行了监测，MRD+患者的总生存期较短（HR 3.8，p = 0.006），MRDneg 无反应者的总生存期与 MRDneg 反应者相当（有反应和无反应以形态学来评估）。 MRD 检测不同观察者之间可靠性很高，Krippendorffs α 为 0.860。随访时 MRD 分析的平均时间非常短，为 04:31 分钟。

因此，此单管多色流式方案+这种固定门分析MRD的标准化方式，大大提高了不同分析者之间的可靠性，加快了分析速度，可能为多中心MRD 评估提供基础。

信源：Röhnert MA, Kramer M, Schadt J, et al. Reproducible measurable residual disease detection by multiparametric flow cytometry in acute myeloid leukemia [published online ahead of print, 2022 Jul 18]. Leukemia. 2022;10.1038/s41375-022-01647-5. doi:10.1038/s41375-022-01647-5

lingangsmile

好好，规范且高效！