请教CD8+T细胞相关检测

面团胖宝宝 · 发表于 2022-7-23 14:26:27

我要比较正常人和患者的CD8+T细胞增殖（用CFSE）和相关因子是否有差异：测表面的FasL,CD107a，胞内的穿孔素、颗粒酶、干扰素γ，需要加CD3/CD28激活吗？流式测了一次FasL有显著差异，CD107a不太测得出来，请问它是要T细胞激活了才会表达吗？

applebernie · 发表于 2022-7-23 14:26:28

面团胖宝宝发表于 2022-7-27 10:53
请问你加刺激的时间是多久呢，我一般刺激的48h，不知是否合理

如过条件多的话是不是用96孔板做比较好。我是先anti-CD3 coat流式管4度过夜（或37度3小时），然后种细胞并anti-CD28刺激15-16小时（过夜），分泌抑制剂我是T0就加的，虽然不太好（说明书建议Glogi Block加了最好孵育不要超过12个小时）。刺激时间短的我见过刺激6个小时的，时间长的话我看有人最后6个小时再加Glogi Block。我没有做过非常严谨的time study, 只是做了16，20，24小时几个点，最后综合考虑为最小化Glogi Block的影响选了16小时。

如果只是想刺激的话48个小时可能是有点长了，但也得看你要加的药物的作用时间。当然还有人做更长时间的刺激，不过目的都是为了做proliferation，每隔几天还得补充IL-2。

Climber · 发表于 2022-7-23 14:33:00

需要感觉CD3 CD8或者PMA+Ionomycin都可以

Climber · 发表于 2022-7-23 14:33:22

Climber 发表于 2022-7-23 14:33
需要感觉CD3 CD8或者PMA+Ionomycin都可以

纠正 CD28不是CD8

面团胖宝宝 · 发表于 2022-7-23 14:48:58

Climber 发表于 2022-7-23 14:33
需要感觉CD3 CD8或者PMA+Ionomycin都可以

谢谢你的回答，因为之前看帖子说临床上都是直接测，加了激活它还能体现出正常人和病人之间的区别吗？（但是不激活又测不出来，就很迷茫哈哈哈~

Climber · 发表于 2022-7-23 15:01:58

面团胖宝宝发表于 2022-7-23 14:48
谢谢你的回答，因为之前看帖子说临床上都是直接测，加了激活它还能体现出正常人和病人之间的区别吗？（但 ...

您想问的是刺激之后的差异能不能反映病人的情况吧，我觉得是可以的，因为患者和正常人T细胞的效应能力有差异的话，刺激之后其分泌的细胞因子也可能是有差异的

Climber · 发表于 2022-7-23 15:03:04

您上面所说的干扰素颗粒酶我们做小鼠的方案是用PMA+Inomycin+分泌抑制剂刺激4h后检测的

面团胖宝宝 · 发表于 2022-7-23 15:11:24

Climber 发表于 2022-7-23 15:01
您想问的是刺激之后的差异能不能反映病人的情况吧，我觉得是可以的，因为患者和正常人T细胞的效应能力有 ...

嗯呐明白啦~十分感谢！

面团胖宝宝 · 发表于 2022-7-23 15:26:51

Climber 发表于 2022-7-23 15:03
您上面所说的干扰素颗粒酶我们做小鼠的方案是用PMA+Inomycin+分泌抑制剂刺激4h后检测的
...

还想问一下，我一直用的是CD3/CD28激活，是否也需要加分泌抑制剂呢？不加的话是不是因子都分泌到胞外了？

Climber · 发表于 2022-7-23 15:45:03

面团胖宝宝发表于 2022-7-23 15:26
还想问一下，我一直用的是CD3/CD28激活，是否也需要加分泌抑制剂呢？不加的话是不是因子都分泌到胞外了？ ...

肯定是要加的

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