简单而又不简单的补偿，续谈大于100的补偿

niwanmao

流式中文网正是因为众多热心站友的参与，才能绽放出活力和能量。昨天发布了《补偿超过100是否合理？》，根据补偿原理，我们总觉得“超过100的话，可能就需要考虑换通道检测荧光了”。但在纽约的热心站友孙大千老师为我们提供了一份很不错的资料《The impact of adjusting PMT voltages on spillover and compensation》后，我们觉得大于100的补偿值在正确优化的电压条件下，还是可以接受的。这份资料来自悉尼大学的Thomas Myles Ashhurst、Adrian Lloyd Smith等人做的工作。
我们在平时做多色流式的时候（一般>4色比较明显），会发现有些补偿值，会随着电压变化而变化，那么是否应该为了减小补偿值而调节电压呢？
Thomas等人认为，不应该，因为减少电压并不能减少SE（Spreading Error），因此，没有必要为了减小补偿值而调节电压，而且值得一提的是，特别要注意电压的优化，具体优化方法我们6月份报道Cyto2016内容时提到过：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5235-1-1.html 。当电压在可接受范围内时，补偿>100也是可以的。

SE的概念请参见2013年的文献：
Nguyen R, Perfetto S, Mahnke YD, Chattopadhyay P, Roederer M. Quantifying spillover spreading for comparing instrument performance and aiding in multicolor panel design. Cytometry A. 2013 Mar;83(3):306-15. doi: 10.1002/cyto.a.22251. Epub 2013 Feb 6. PubMed PMID: 23389989; PubMed Central PMCID: PMC3678531.

例如下面这个图，上面一行两个图是UVLD单染细胞和BUV395单染微球混合而成，调节补偿后，补偿值达到138.3％，SE值为5.1。用这个电压和补偿值检测全染的脾脏标本，图形是可以接受的，实际上还是可以用的。


该PPT的总结是：

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luvianlamia

倪老师，补偿值有一个大概的范围吗？
有位老师帮忙调补偿值，电压拉得很大，补偿值都快到一千了（嚎啕大哭）。数据感觉都不合理了

niwanmao

luvianlamia 发表于 2019-3-11 14:19
倪老师，补偿值有一个大概的范围吗？
有位老师帮忙调补偿值，电压拉得很大，补偿值都快到一千了（嚎啕大哭 ...

你说的应该是spillover，1000也太离谱了，一般超过100，都需要找原因，往往是荧光素搭配的问题居多。