GFP和RFP融合表达质粒转染293T 后分选GFP阳性细胞，散点图奇怪

猪小乐呀

再问楼主用的RFP是dsRFP么？

ghqiu09

猪小乐呀 发表于 2017-9-21 16:16
楼主，倪老师，您好。我想做类似的实验。我的两个荧光是EGFP，另外一个想选dsRFP或者mcherry之一。EGFP通常 ...

你要先确认你们的流式细胞仪有没有dsRFP或者mCherry的激发波长，都没有的话只能选别的了。貌似这两个都不是488或者640激发的。

猪小乐呀

ghqiu09 发表于 2017-9-21 16:56
你要先确认你们的流式细胞仪有没有dsRFP或者mCherry的激发波长，都没有的话只能选别的了。貌似这两个都不 ...

哦 是的  只有488和633nm两个激发波长。看来还需要有561nm的激发光，谢谢。

niwanmao

猪小乐呀 发表于 2017-9-21 16:16
楼主，倪老师，您好。我想做类似的实验。我的两个荧光是EGFP，另外一个想选dsRFP或者mcherry之一。EGFP通常 ...

你的流式细胞仪是什么样的配置（激光器、滤光片）？

slqian

这种如果用两个激光不共线，一点问题也没有。

椴树

猪小乐呀 发表于 2017-9-21 16:45
再问楼主用的RFP是dsRFP么？

抱歉，因为已经毕业，好久没来论坛了。我的蛋白是mcherry 但是跟dsRFP应该是一样的激发和发射波长，这两个蛋白貌似区别只是成熟时间和亮度的区别？

^_^_恕_^_^

GFP的发射光特定空间位置下是可以激发RFP（不知是不是TagRFP）的，称作为FRET，不知道会不会影响？

miliamlau

^_^_恕_^_^ 发表于 2017-11-28 20:07
GFP的发射光特定空间位置下是可以激发RFP（不知是不是TagRFP）的，称作为FRET，不知道会不会影响？ ...

没有561激光器的话有可能，有561激光器没事。因为即使有FRET，RFP的通道也不在488nm激光上。