关于血浆微粒射门和定量的问题

文火火

倪老师，你好，好久不见。
以前曾经问过您关与检测微粒射门和定量的问题，在FSC-SSC图上圈出0.8μm的标准微球(APC标记)所在的区域，在此区域内分析目的微粒。
文献上说“The diameter of the beads (3 μm, gate B) discriminated
them from the MP population on the FSC-SSC
cytogram. A known number of beads was added to each
sample tube (e.g., 200,000), and the analysis was
stopped when 20,000 beads were counted.”
但是目前有一个问题，我0.8μm的微球是APC标记，两种抗体是PE和APC标记，那3μm的微球是不是要跟抗体的颜色不一样？

不同大小的颗粒，例如3μm和0.8μm如果发光相同，在流式图上能区分开吗？那我能选择PE或者APC标记的3μm的颗粒吗？

PS：因为买不到FITC标记的3μm的微球。只有红色或蓝色的荧光。

谢谢倪老师！

niwanmao

3μM的微球是为了定位你0.8μM颗粒的位置，所以只关系到FSC和SSC两个参数才对啊。
因此，我觉得应该是选择没有荧光的，以免干扰你那两种抗体的检测。

文火火

恩，我也是这样想的，要么用没有荧光的，要么用跟抗体荧光波长完全不重叠的荧光，谢谢倪老师！