关于CFSE总是单峰的情况

wangyufei517

如下图，我尝试过几次CFSE的染色，总是不成功，明明在镜下看到有好多聚集的细胞团，但是上机之后就检测不到CFSE的变化，球球各路大神指点一下
我用的方法是参考了之前倪老哥分享的步骤做的。
1.用0.1%BSA制备脾脏单细胞悬液，包括裂红
2.取1×10^7细胞用1ml 0.1%BSA重悬后加入1μl 2.5mM CFSE，37℃染色10min，5倍体积预冷含10%FBS 1640培养基冰上静置5min
3.离心后再用10%FBS 1640培养基洗两遍
4.前一天晚上用200μl 2μg/ml anti-CD3包被，37℃过夜
5.脾细胞按2×10^5 cells/well铺板，co-culture组加入1×10^5 cells/well，补齐培养基到200μl，加入2μg/ml anti-CD28
6.37℃培养3天上机检测


救救孩子吧

niwanmao

浓度不对啊，我之前提供的Protocol建议做一下CFSE染色浓度梯度，从10uM~2uM终浓度，你做了吗？：
CFSE检测细胞增殖详细protocol
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4562-1-1.html
(出处: 流式中文网)

wangyufei517

niwanmao 发表于 2022-10-4 14:49
浓度不对啊，我之前提供的Protocol建议做一下CFSE染色浓度梯度，从10uM~2uM终浓度，你做了吗？：
CFSE检测 ...

之前看您发的另外一篇，推荐浓度是2.5μM，我就一直用的是这个浓度，那我下回用浓度梯度试一试