同一份样本用全血和PBMC上样后图形发生改变

黄志敏

用同一份健康人的全血和PBMC做检测，标记了特异性结合HIV病毒的中和抗体，荧光素是APC，流式图有很大差别，这是抗体的原因还是前处理不同带来的差异？在HIV阳性样本中也是这种现象，做过FMO，和健康人全血的细胞群位置是一样的。（染色CD3/CD4/CD45和死活）

                               
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niwanmao

不知道你具体说的是什么图，可将图放上来看看。

黄志敏

niwanmao 发表于 2023-5-16 08:22
不知道你具体说的是什么图，可将图放上来看看。

已上传图片，谢谢老师

niwanmao

黄志敏 发表于 2023-5-16 10:10
已上传图片，谢谢老师

FSC/SSC散点图有无变化？

黄志敏

niwanmao 发表于 2023-5-16 15:00
FSC/SSC散点图有无变化？

散点图无变化，各细胞亚群的位置也是相同的，包括电压和补偿都是保持一致

闷油瓶

黄志敏 发表于 2023-5-16 16:21
散点图无变化，各细胞亚群的位置也是相同的，包括电压和补偿都是保持一致 ...

你的操作流程呢？

黄志敏

闷油瓶 发表于 2023-5-16 16:43
你的操作流程呢？

全血是100ul加抗体后用不含甲醛的溶血素裂解，然后洗涤，染死活，PBMC是提取PBMC调整细胞数后染色直接上机，没有洗涤，不同点在于全血是PBS重悬，PBMC是1640培养基重悬，都加了FC block进行封闭了

niwanmao

黄志敏 发表于 2023-5-16 16:21
散点图无变化，各细胞亚群的位置也是相同的，包括电压和补偿都是保持一致 ...

FSC/SSC其实是有变化的，第二个图的状态明显要差。

黄志敏

niwanmao 发表于 2023-5-16 16:46
FSC/SSC其实是有变化的，第二个图的状态明显要差。

这个会对后面分群产生这么大的影响嘛，因为一共做了四个样本都是相同情况

闷油瓶

黄志敏 发表于 2023-5-16 16:58
这个会对后面分群产生这么大的影响嘛，因为一共做了四个样本都是相同情况 ...

你最后一张图是PBMC吧？