PE-CY7诡异的隐形群

智人小赵 · 发表于 2024-4-27 17:10:19

最近用PE-CY7染小鼠的脾脏细胞，最开始都是正常的分群如图1，最近几次发现出现图2中诡异的阴性群，我怀疑可能是PE-Cy7断裂了，不知道老师们是否有类似经验，求指教，谢谢！！

智人小赵 · 发表于 2024-4-27 17:14:39

补充说明：图2为活细胞中PE-cy7分布；此外只是简单表面染色，没有固定破膜

智人小赵 · 发表于 2024-4-27 17:16:44

反圈门看起来抗原分布和正常细胞也没有差别

niwanmao · 发表于 2024-4-28 20:57:40

如果串联染料断裂，意味着PE通道会出现荧光，而不是PE-cy7出现非特异性信号

首先检查一下仪器状态，跑一下质控微球
其次检查一下电压条件
再次看样本是否新鲜
最后，如果为多色，尝试一下单染

范晋波 · 发表于 2024-4-29 09:18:33

这个通道就这样，跟染什么断不断裂没关系，而且有些机器的PMT就是这样，阴性峰款的很，拉一下坐标轴就可以了

智人小赵 · 发表于 2024-4-29 10:01:42

niwanmao 发表于 2024-4-28 20:57
如果串联染料断裂，意味着PE通道会出现荧光，而不是PE-cy7出现非特异性信号

首先检查一下仪器状态，跑一下 ...

多谢倪老师，仪器质控YL3通道有些问题，YL4是正常的，不知道这个是否会影响，电压和样本制备和之前的是相同的，没有改变过的。单染管和空白管今天我打算跑一下看看，有后续结果再跟你分享，谢谢

智人小赵 · 发表于 2024-4-29 10:03:36

范晋波发表于 2024-4-29 09:18
这个通道就这样，跟染什么断不断裂没关系，而且有些机器的PMT就是这样，阴性峰款的很，拉一下坐标轴就可以 ...

感谢回复，这个分子应该是连续表达的，之前的实验结果也都是正常连续表达不分群的，理论上不应该出现这些阴性峰，所以这群阴性峰让我比较苦恼。

智人小赵 · 发表于 2024-4-29 10:20:28

这个图看上去更直观一些，这些压线的细胞理论上应该是不存在的

智人小赵 · 发表于 6 天前

后续跑了单染管和空白管，负轴还是有这些阴性群，初步确认是机器的原因，谢谢大家的意见

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[试剂耗材] PE-CY7诡异的隐形群