CD4+CD25+ T细胞磁珠分选步骤

niwanmao

这是samly0站友在http://www.flowcyto.cn/bbs/forum ... &ptid=1479&pid=5845回复时发布的精彩内容，感谢samly0.

取1×10⁷个细胞量，用含0.5% BSA，2mM EDTA的PBS(buffer液)重悬，加入适量的生物素标记的鸡尾酒抗体(Biotin-Antibody Cocktail)，混匀，4℃避光孵育10min，再加入适量抗生物标记的磁珠(Anti-Biotin MicroBeads)和CD25-PE抗体，混匀，4℃避光孵育15 min，用buffer洗涤后1000 rpm离心10 min，弃上清液，沉淀用500 μl buffer重悬，置LD分离柱于MidiMACS分选器中，l ml缓冲液冲洗LD分离柱2次后，将细胞悬液加入分离柱中，收获从分选柱中流出的细胞即为CD4+T细胞。将收集到的CD4+ T细胞混悬液1000 rpm离心10 min，弃上清液，沉淀用buffer重悬后加入适量的抗CD25-PE磁珠，混匀，4℃避光孵育15 min，用buffer洗涤后1000 rpm离心10 min，弃上清液，沉淀用500 μl buffer重悬，置MS分离柱于MidiMACS分选器中，l ml缓冲液冲洗MS分离柱2次后，将细胞悬液加入分离柱中过柱，再用buffer过柱直至流出液清亮不含细胞，将柱子移离分选器后，收集柱中细胞即为CD4+CD25+ T细胞

olivezhou0716

非常感谢分享，为我们的客户省去了很多翻译的时间。

木石织梦

阴性分选CD4+时，加入适量抗生物标记的磁珠(Anti-Biotin MicroBeads)和CD25-PE抗体，为什么要加CD25-PE抗体？

niwanmao

木石织梦 发表于 2013-5-3 01:21

                               
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阴性分选CD4+时，加入适量抗生物标记的磁珠(Anti-Biotin MicroBeads)和CD25-PE抗体，为什么要加CD25-PE抗体 ...

@samly0     @olivezhou0716 帮忙解答一下。

olivezhou0716

这个试剂盒是一个先去除后阳选的磁珠盒子，第一步是通过biotin间标磁珠去除CD4 T细胞以外的细胞，第二步通过PE间标磁珠将CD25+细胞阳选出来。加biotin和CD25-PE抗体在一起，主要是为了节省时间，也可以再分选出CD4 T细胞之后再加，那样细胞损失多些，时间长些

木石织梦

olivezhou0716 发表于 2013-5-3 14:47

                               
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这个试剂盒是一个先去除后阳选的磁珠盒子，第一步是通过biotin间标磁珠去除CD4 T细胞以外的细胞，第二步通 ...

嗯嗯，有理。谢了，学习了！呵呵

olivezhou0716

有问题大家多交流！

linhai52086

老师您好 我在用德国美天旎磁珠分选法(MACS)分选CD4+CD25+CD127- 的Treg，请问CD127是否必须？我想用第二步分选剩下的细胞作为效应T细胞（CD4+CD25-）不知道正确吗？谢谢

niwanmao

linhai52086 发表于 2017-5-5 15:28
老师您好 我在用德国美天旎磁珠分选法(MACS)分选CD4+CD25+CD127- 的Treg，请问CD127是否必须？我想用第二步 ...

Treg应该是CD127-或low，所以用CD127来负性分选不是很合适。

linhai52086

niwanmao 发表于 2017-5-5 18:55
Treg应该是CD127-或low，所以用CD127来负性分选不是很合适。

谢谢老师　我是想用把ＭＳ柱中流下来的细胞收集起来，作为效应Ｔ（ＣＤ４＋ＣＤ２５－）细胞来培养，不知这样对不对？