流式细胞术能在检测H7N9禽流感病毒中发挥作用吗？

niwanmao

看了4月1日卫计委紧急召开的会议幻灯《人感染H7N9禽流感病毒病原学特点及实验室检测》，实时PCR在其中发挥了重要作用，因为核酸的探针设计现在非常方便，而且扩增效率高，这是实时PCR的优势。在前段时间，我发过一个帖子《流式细胞术检测染色体重复DNA序列》，这说明流式可以实现核酸序列的检测。
那么是否可以将核酸探针标记上荧光，应用于这次的H7N9禽流感病毒检测呢？是否有站友做过病毒方面检测的研究？诚请分享经验，一起探讨学习。


＝＝＝在线查看《人感染H7N9禽流感病毒病原学特点及实验室检测》＝＝＝
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2013-4-4 16:30 上传

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可可爸

以前有做过这方面的研究，应用的是Luminex技术，原理其实跟流式差不多，但多了一步基因扩增的过程。
一直也在思考，是不是可以将方法移植到流式上，不知大家有何高见？

niwanmao

可可爸 发表于 2013-04-05 15:30:09

                               
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以前有做过这方面的研究，应用的是Luminex技术，原理其实跟流式差不多，但多了一步基因扩增的过程。
一直也

只要能够标记上荧光，流式就可以检测，@可可爸  是否给我们分享一下你以前做研究的心得和体会？

可可爸

我一直有个疑问，就是为什么流式在基因检测方面的应用不多。分析原因可能在于常规的分子诊断需要引物扩增目标序列，需要探针特异性识别。如果要用流式检测分析则首先需要一种类似在Luminex上应用的微球：可以将探针偶联到球上，同时这个微球又可以方便的被流式检测，而目前这种微球好像没有。其次，跟检测蛋白的抗原抗体反应不同，分子诊断多了一步基因扩增，再使用流式检测步骤繁杂，优势不明显。
当然，如果有很好的设计，我们可以利用流式平台同时检测多种基因表达，同时鉴别多种病原微生物。
这只是我的体会，不知道大家在这方面有无更新的资讯。

niwanmao

可可爸 发表于 2013-04-06 00:02:14

                               
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我一直有个疑问，就是为什么流式在基因检测方面的应用不多。分析原因可能在于常规的分子诊断需要引物扩增目

探针应该可以跟荧光素结合的，这个我倒觉得问题不大，第二个问题确实是个难题，如果扩增，时间相差无几，流式没什么优势，如果不扩增，目标分子太少的时候容易假阴性。  我曾经看到过几篇流式检测核酸的文献，到时候搜集起来大家讨论。

可可爸

很感兴趣 可以好好讨论讨论

hbezyr

弱弱问下，如果是用RT-PCR可以很快检测出来，为什么还要用流式来啊？！

niwanmao

hbezyr 发表于 2013-4-8 20:14

                               
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弱弱问下，如果是用RT-PCR可以很快检测出来，为什么还要用流式来啊？！

我目前对于PCR与流式的结合确实也不太懂，但是从BEAMing相关文献大致看来，至少有一个应用是非常好的。它可以实现PCR在水油界面内的单独运行，然后将相关基因用流式分选出来，最后进行该段基因的测序，可测定该段基因上非常稀少的点突变。明后天，我放几篇BEAMing的文献上来。

原文见：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC166396/?report=reader
BEAMing技术流程图

BEAMing技术流程图

结果检测

结果检测

可可爸

流式还有个优势就是可以通过设计同时检测分析多种待测基因的表达情况或多种病原体感染情况。

dragonhzqsmmu

另外加上不同的表面标志物应该可以准确评估不同细胞亚群中病毒的载量？但关键是有几个问题：
正如LZ前面提到的几个适用的技术都有相关的专利壁垒，不能很好地被多家公司提供，所以成本居高不下，例如LNA技术的专利和millipore的灵光RNA技术专利