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做到这11点,你的流式实验就能成功

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发表于 2013-4-26 14:18:50 | 显示全部楼层 |阅读模式

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当然,这11点只是流式技术和质量上的保证,前提是需要你的实验理论依据是正确的,设计是合理的才行

  • 阅读大量正确而权威的流式方法,而不仅仅只参考厂家的protocol(流式中文网protocol专版:http://www.flowcyto.cn/bbs/forum ... ypeid&typeid=35);
  • 了解哪些荧光可在您的流式细胞仪上正确工作
  • 设计抗体方案时,尽可能选择那些亮度高而渗漏少的标记
  • 滴定您的抗体。有时候其实厂商推荐的用量是过量的,例如下面的CD4滴定图(实名验证站友及以上级别可查看).
  • 列出您的“战斗”计划。一般的PROTOCOL只能帮助你做好该项实验,但真正实施时,还是需要对其中用到的各项试剂、耗材以及每一步所需做的详细工作做出一个真正有效的规划(参见下面的规划示例图,实名验证站友及以上级别可查看)。
  • 总是使用死细胞鉴别标记,死细胞标记能有效去除一些非特异性染色,使细胞分群更清楚,分析更客观(参见下面的死细胞染色分析比较,左侧为未使用死细胞染料去除死细胞,存在一群非特异性细胞,右侧去除死细胞后,分群非常清楚,注册会员及以上级别可查看)。
  • 为每一次实验均设置正确的FMO对照(荧光扣除对照)
  • 使用Antibody Capture Beads来调节补偿,这使得补偿调节更稳定、更方便。(流式中文网注:对于此类beads,我也是初次接触,网上大致搜了下,似乎只找到coulter的VersaComp Antibody Capture Beads,不知道其它公司是否也有?)
  • 尽量以低速获取您的标本,以得到更高的分辨率。
  • 尝试使用多种设门方法来分析您的数据(如反设门、去除粘连体设门等等)。
  • 定期对您的仪器进行质控,并建立每个应用特异性的质量保证protocol
(流式中文网简译,详细内容请参见下方原文解释和图片,实名验证站友及以上级别可查看)

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发表于 2013-4-26 17:42:34 | 显示全部楼层
BD 有补偿beads
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2013-4-26 18:22:10 | 显示全部楼层
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2013-4-26 21:18:30 | 显示全部楼层
嗯,想问下。这种流式实验的checklist,有没有个模板啊?建议我们根据自己的需要,大家合作整理一个出来。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2013-4-26 21:48:16 | 显示全部楼层
hbezyr 发表于 2013-4-26 21:18
嗯,想问下。这种流式实验的checklist,有没有个模板啊?建议我们根据自己的需要,大家合作整理一个出来。
...

每个人、每项不同的实验都会有不同的具体计划,会很多,但是如果建立这么一个库,肯定是很好的参考资料。非常欢迎大家能够分享自己实验或检测工作中的详细计划,共享、共建。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2013-4-27 11:41:30 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2013-4-26 21:48
每个人、每项不同的实验都会有不同的具体计划,会很多,但是如果建立这么一个库,肯定是很好的参考资料。 ...

正在用BD的comp beads
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2013-4-27 13:18:13 来自手机 | 显示全部楼层
haven_t 发表于 2013-4-27 11:41
正在用BD的comp beads

感觉如何?比用标本方便吗
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2013-4-27 14:54:46 | 显示全部楼层
肯定比标本方便,起码不用溶血,而且对一些表达低的抗体如CD34比较好用,不过调电压还是要用标本。

点评

非常感谢,这些资料对我很有帮助: 5.0
非常感谢,这些资料对我很有帮助: 5
  发表于 2013-5-6 15:13
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2013-5-6 13:48:48 | 显示全部楼层
eBioscience 也有补偿beads,说明书如下:http://us.ebioscience.com/media/pdf/tds/01/01-1111.pdf
用了一下,感觉很方便!

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非常感谢,这些资料对我很有帮助: 5.0
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  发表于 2013-5-6 15:13
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2013-5-9 00:36:54 | 显示全部楼层

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非常感谢,这些资料对我很有帮助: 5.0
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谢谢:)  发表于 2013-5-9 09:13
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
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