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CFSE检测淋巴细胞增殖的玄妙之处(4个关键)

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发表于 2013-5-10 14:58:12 | 显示全部楼层 |阅读模式

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用羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE)检测PBMC中淋巴细胞(如T细胞)的增殖,并不是一个傻瓜式的方法。CFSE对于细胞有毒性,如CFSE标记浓度未进行优化,则可阻碍细胞增殖而对实验结果产生错误的干扰。一篇由Quah等人发表在Nature Protocols上的文章详细讲述了CFSE标记条件及其优化(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17853860

CFSE检测细胞增殖

CFSE检测细胞增殖

CFSE是一种可透过细胞膜的荧光染料,激发和发射波长与FITC类似,因此可在FITC通道检测。CFSE的前体CFDA-SE是没有荧光的,但可直接透过细胞膜进入细胞,而一旦进入细胞,其乙酸基团被胞内酯酶移除后,即可产生具有荧光的CFSE,且不容易释放到细胞外。同时,CFSE的琥珀酰亚胺酯与伯胺基可共价结合,从而长时间存在于细胞内。随着细胞的分裂,CFSE逐渐分配到子代细胞中,每次减半,因此,可轻松使用流式细胞术检测到细胞分裂了几代。
按照Quah等人的protocol,CFSE在淋巴细胞增殖中的应用需注意以下4方面条件:
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总之,CFSE检测细胞增殖的步骤和方法有不少玄妙之处,各位站友在做实验过程中记得对以上提到的4个因素进行关注和优化,建议进一步阅读下列文献:

Monitoring lymphocyte proliferation in vitro and in vivo with the intracellular fluorescent dye carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester. Quah BJ, Warren HS, Parish CR. Nat Protoc. 2007;2(9):2049-56.

Measuring lymphocyte proliferation, survival and differentiation using CFSE time-series data.Hawkins ED, Hommel M, Turner ML, Battye FL, Markham JF, Hodgkin PD. Nat Protoc. 2007;2(9):2057-67.


 楼主| 发表于 2015-6-30 20:42:10 | 显示全部楼层
王娟 发表于 2015-6-30 20:33
倪老师,我最近要做CFSE染色,看了您说的这四点之后,我有个疑问,到底稀释CFSE的PBS中要不要加0.1%BSA呢? ...

游离氨基酸会结合CFSE,而不是蛋白质:)
发表于 2013-5-10 21:26:43 | 显示全部楼层
CFDA-SE其实很好用

这里上传的是使用CFSE监测淋巴细胞增殖的文字部分,视频部分参见:http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2375-1-1.html
使用流式中文网资料阅读器在线阅读,免流星,内容与附件完全一样,且支持划词翻译使用帮助

(如图片无法正常显示请复制链接:http://www.flowcyto.cn/bbs/reade ... xm8e75q5pMp4oPbfy6k
◢如确实需要下载附件,请见: use_of_CFSE.pdf (430.36 KB, 下载次数: 92, 售价: 1 流星)

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 楼主| 发表于 2013-5-10 22:37:33 | 显示全部楼层
20071271 发表于 2013-5-10 21:26
CFDA-SE其实很好用
本来还有一个视频,传不上

视频有多大?可发到我的邮箱,我发上来与大家分享。邮箱见网站最下方。
发表于 2013-5-12 09:06:47 | 显示全部楼层
检测的时候需要排除死细胞
发表于 2013-5-13 09:04:03 | 显示全部楼层
好东西,学习了,3Q
发表于 2013-5-23 15:11:13 | 显示全部楼层
受益匪浅。。非常感谢
发表于 2013-10-31 12:38:49 | 显示全部楼层
好文章 支持
发表于 2013-11-7 11:19:12 | 显示全部楼层
这个实验的原理很简单,检测也简单,但是成功率不高。看了上述文章,受益匪浅。
发表于 2015-6-30 20:33:44 | 显示全部楼层
倪老师,我最近要做CFSE染色,看了您说的这四点之后,我有个疑问,到底稀释CFSE的PBS中要不要加0.1%BSA呢?您说蛋白中的氨基酸会让CFSE损失,为什么细胞还要用含有血清的PBS重悬呢?
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