磁珠分选有没有特别的注意事项？

木石织梦

各位有做磁珠分选的大侠们，小妹最近做磁珠分选，严格按照说明书做的，但是，纯度都不高，请问大家做磁珠分选过程中有没有什么特别的注意事项？

niwanmao

需要写@olivezhou0716  来专门讲解一下。

samly0

我做磁珠分选时，纯度基本上有98%-100%。你可以试试这两招：1、置4度冰箱避光孵育磁珠抗体时，每隔5分钟轻弹一次试管，目的让受重力作用沉淀下来的细胞再次弹松散，增加跟磁珠抗体接触的机会。2、孵育好的细胞悬液通过LD柱或MS柱后，收集用活塞打下来的阳性细胞，再重新过一次LD柱或MS柱，阳选细胞得率多的时候可以再重复1次。重复过柱的目的就是为了提高纯度。

木石织梦

samly0 发表于 2013-5-21 10:49

                               
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我做磁珠分选时，纯度基本上有98%-100%。你可以试试这两招：1、置4度冰箱避光孵育磁珠抗体时，每隔5分钟轻 ...

好的，非常感谢你的帮忙。想问下，重新过一次柱子，是不是要换一支新的柱子？还是直接用原来的柱子？另外，想请教你，洗柱子的时候，是否需要流干后再洗第二次，还是不能让它流干？

olivezhou0716

木石织梦 发表于 2013-5-21 11:12

                               
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好的，非常感谢你的帮忙。想问下，重新过一次柱子，是不是要换一支新的柱子？还是直接用原来的柱子？另外 ...

需要换一个新柱子。洗涤需要液体流完，但不要让柱子干掉

samly0

木石织梦 发表于 2013-5-21 11:12

                               
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好的，非常感谢你的帮忙。想问下，重新过一次柱子，是不是要换一支新的柱子？还是直接用原来的柱子？另外 ...

想提高纯度，还是换新柱子再过一遍吧。我们为了提高得率，通常都不换柱子，而且分选完上流式看纯度也能达到98-100%的纯度。你说的洗柱子是分选的哪一步？分选过程是不能让柱子干掉的，过完细胞液要用buffer再过两到三遍柱子，直至流出的液体清亮无细胞，分选完了，我们再加buffer用活塞打三遍，每边都重加buffer的。

木石织梦

samly0 发表于 2013-5-21 15:53

                               
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想提高纯度，还是换新柱子再过一遍吧。我们为了提高得率，通常都不换柱子，而且分选完上流式看纯度也能达 ...

我说的洗柱子是说过完需要分选的细胞后，洗涤柱子。非常感谢你的热心解答，对我太有帮助了，谢谢！

63735523

那阴选怎么提高纯度，也是再过柱么

samly0

63735523 发表于 2013-5-25 19:53

                               
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那阴选怎么提高纯度，也是再过柱么

阴选的纯度很难达到阳选那么高的，你的抗体量是按说明书的比例足量给不？你再过一遍柱子看看纯度会不会高点吧，这个一试就知道的，要是还是不行，就问供货商的技术支持看看有什么办法可以提高阴选纯度了，要不就改用流式分选吧

niwanmao

samly0 发表于 2013-6-8 15:59

                               
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阴选的纯度很难达到阳选那么高的，你的抗体量是按说明书的比例足量给不？你再过一遍柱子看看纯度会不会高 ...

@samly0   按照你的经验，流式的分选纯度高还是磁珠的分选纯度高？