问几个细菌的流式分析的问题

wsnxbdr

初学者。想通过SYTO 9和PI同时染色进行饮用水中细菌的死活菌分析。论坛中的资料大多是细胞分析的，所以很多东西看的不是很明白。基于我已有的理解，问几个问题，求解答：

1.不是很理解同型对照，死活菌分析用不到抗体，是不是就谈不上同型对照了？

2.我这种情况，我理解空白对照，就是染料加入无菌的PBS中得到的结果；阴性对照是PBS中加入了细菌但没有染料的结果。不知对不对？

3.对于某种染料，需要设置FL1-3的电压值。比如对于PI，是不是用只有PI没有细菌的PBS做空白实验，得到FL3的直方图。其中电压值是变化的，看哪个电压值可以让FL3的直方图中的点都在某条线的左侧？另外，这条线的取值是怎么决定的，1%或者5%？

4.双染料分析，如果是一个染料对应一组FL1-3的电压值，两个染料同时应用时，FL1-3的每个值是不是要分别取较小的那个？

不明白的地方还很多，以上几个问题若搞懂，应该能进步不少，谢谢大侠了

niwanmao

PI和Syto9测细菌死活比例，相信看了下面的帖子，你应该都懂了：
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2021-1-1.html
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2261-1-1.html

wsnxbdr

niwanmao 发表于 2013-6-14 21:07

                               
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PI和Syto9测细菌死活比例，相信看了下面的帖子，你应该都懂了：
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2021-1 ...

首先感谢倪老师这么快就回复了，我刚看了那两个贴子，不过我的问题主要是关于流式的原理和方法的。所以还是麻烦您能回答下我的几个问题，谢谢了

niwanmao

看来你没仔细看图和讨论内容，看了其实原理也就基本上懂了

1、PI和syto9检测的方法跟抗原表达分析的方法不同，不需要同型对照。
2、空白对照我觉得没必要吧，阴性对照应该是未经实验条件处理的活细菌才对。
3和4的问题看不懂，反正就记住，按照前面给你的两个链接，你把活细菌的FL1、FL2散点图调节成那样子就行了